PCR基因扩增技术在益生菌检测及鉴定中的应用

周世红 2021-06-04 17:42 评论( 0 ) 浏览( 977 )

由于PCR技术可以快速特异地扩增任何期望的DNA片段和目的基因，因而在微生物的分子检测和鉴定领域具有广阔的应用前景，在食品级益生菌检测方面的研究也正逐步展开。

近年来，双歧杆菌分子生物学研究进展迅速，尤其在双歧杆菌遗传转化、基因克隆和表达系统等方面，已有很多研究报道。随着AFLP、RFLP、RAPD-PCR等DNA分子标记技术的发展，这些新技术在双歧杆菌遗传多样性分析、遗传图谱构建、种系发生研究中应用日益广泛。

已有的研究比较了双歧杆菌现有32个种及相关种的16s rRNA基因序列后，发现其1412～1432位的寡核苷酸减基序列(21个)在所有的双歧杆菌中相同，能作为双歧杆菌属特异的寡核苷酸片段，可用其作为PCR的引物来扩增双歧杆菌16S rRNA的基因片段。而模板DNA通过简单的SDS裂解菌体细胞，而后用蛋白酶K去除蛋白即可获得。在此条件下，所有的双歧杆菌可由PCR扩增产生典型的1.35kb的核苷酸片段，而其他细胞不产生此带，故用PCR技术能够进行双歧杆菌的检测、鉴定及分类。

而RAPD-PCR扩增图谱作为一种新的分子标记，具有个体特异性，国内已有研究用筛选的S256引物对9株7种双歧杆菌进行扩增得到了多态性图谱，从图谱中找到了属内种间共有条带，以及种内株间共有条带，同时也有在种水平和株水平上的特征性条带，它们有望作为菌种和菌株鉴定的依据，RAPD图谱具有作为工业益生菌菌株分子标记的潜力。

相关链接：双歧杆菌，核苷酸，蛋白酶K

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