北方伟业计量集团有限公司
10-HOE及13-HOE主要通过含有亚油酸水合酶的野生菌转化亚油酸获得,但野生菌筛选过程繁琐,产物复杂,直接使用亚油酸水合酶可高效专一地合成10-HOE及13-HOE,酶法是合成10-HOE及13-HOE的常用方法之一。Oh等克隆了L.acidophilusNBRC13951中的双键水合酶,这些酶对亚油酸的C-9或C-12双键的水合作用非常专一,因此可以选择性地从亚油酸中生成10-HOE或13-HOE。Chen等研究L.plantarum、L.reuteri、L.hammesii和L.spicheri中亚油酸水合酶的特性,在Escherichiacoli中克隆、表达和纯化了10-LHT,建立了10-LHT的酶活测定方法:4.5mg亚油酸,25μg纯化的10-LHT,在1mL含50mmol/LNaCl、2%乙醇和10%甘油的50mmol/LMES缓冲液(pH=6.1)中,25℃转化3h。Kim等在E.coli中克隆、表达和纯化了10-LHT和13-LHT,研究了两种酶的底物特异性和反应动力学,系统测定了酶转化过程中底物和产物浓度的变化,在10-LHT的酶底比是13-LHT的酶底比6倍的条件下,10-HOE、13-HOE的最终摩尔转化率分别是40%、81%。故目前看来13-LHT的酶转化效率要高于10-LHT,但酶转化相关研究报道较少,需要进行更多酶学特性研究和产物合成研究。
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