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环化酶抑制剂在霉菌中自匀应用

周世红-会员头像-m.cellulartx.com伟业计量
周世红 2021-09-09 17:43 评论( 0 ) 浏览( 967 )

三孢布拉氏霉为毛霉日,布拉霉菌属的一种丝状好氧接合真菌,接合发酵后可以产生大量类胡萝卜素。三孢布拉氏霉生长迅速、易于培养、类胡萝卜素产量高、产物没有毒性,是工业化生产食品级番茄红素的重要微生物。三孢布拉氏霉生产的番茄红素于2005年获得美国食品和药物管理局批准,2006年获得欧盟批准在市场销售。

为了进一步提高三孢布拉氏霉的番茄红素产量,胺类和含氮杂环类化合物均得到了广泛应用。Choudhari等对咪唑、吡啶、三乙胺、哌啶和烟酸等环化酶抑制剂在三孢布拉氏霉中的作用进行评价,发现哌啶的作用效果尤为显著,进一步补充维生素A乙酸酯后,番茄红素质量浓度提高了7.76倍,达到775mg/L。也有研究者通过比较咪唑、尼古丁、N-甲基吗琳、吡啶和哌啶的阻断效果,得出尼古丁效果最佳(番茄红素积累量提高了112.89倍)。进一步对3种吡啶衍生物2,6-二甲基吡啶、2,5-二甲基吡啶、2-氨基-6-甲基吡啶和3种咪唑衍生物α-甲基吡啶、2-甲基咪唑、2-异丙基咪唑的作用效果进行比较。2-氨基-6-甲基吡啶和2-异丙基咪唑的效果最佳,10g/L的2-氨基-6-甲基吡啶使番茄红素产量高达692mg/L,β-胡萝卜素显著下降(65.69mg/L),0.3g/L的2-异丙基咪唑基本可以完全抑制番茄红素环化,使番茄红素比例高达96%。作者所在课题组前期应用三丙胺、三乙胺、三丁胺、三甲胺、二异丙胺和异丙胺6种环化酶抑制剂处理三孢布拉氏霉,发现三丙胺阻断效果最佳,番茄红素含量可提高315.8倍,其比例从1.7%提高到90.1%,总类胡萝卜素含量也提高了5.9倍,并且5种叔胺化合物均可以促进类胡萝卜素生成。环化酶抑制剂CPTA和MPTA也具有促进类胡萝卜素生成的作用。可见,叔胺类化合物及其衍生物除了具有环化酶抑制剂的作用外,还可以提高总类胡萝卜素产量。因此,在三孢布拉氏霉中,胺类化合物的作用效果优于含氮杂环类化合物。此外,环化酶抑制剂通常对三孢布拉氏霉具有一定的毒性。例如过早和过量添加MPTA会影响菌体正常生长而降低番茄红素的产量。有研究者发现当添加咪唑的时间过晚(>40h)时,大部分番茄红素已在环化酶的催化下发生环化反应,番茄红素产量也会相对下降。

粗糙脉孢霉俗称红色面包霉,主要用于生产纤维素酶,其代谢过程中也可以产生类胡萝卜素,环化酶抑制剂结合其他助剂可以提高番茄红素产量。在粗糙脉孢霉中使用的环化酶抑制剂主要为含氮杂环类化合物,例如2-异丙基咪唑结合柠檬酸、香叶醇、酮康唑等助剂使番茄红素产量提高77.7%。不同添加量和不同添加时问对番茄红素产量有较大影响,而对菌丝和孢子生物量却没有太大影响,在发酵60h后添加100mg/L烟草水提物(有效成分为尼古丁)可以使菌丝和孢子的番茄红素产量达到最高(分别为0.65mg/L和4.37mg/L,为对照的114%和112%)。但是也有研究者认为发酵早期(0~24h)添加尼古丁会抑制粗糙脉孢菌的生长,进而降低番茄红素产量,最适宜的添加时间为发酵40h,可使番茄红素产量提高2.38倍(57.31μg/g)。

相关链接:2-甲基咪唑纤维素酶三丙胺2-氨基-6-甲基吡啶

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