黄豆中蛋白质含量的测定

一、目的和要求

①通过本实验加深对凯氏定氮法测定原理的认识和理解。

②通过本实验掌握凯氏定氮法中样品消化、蒸馏、吸收等技能的操作。

二、原理

本实验是利用蛋白质是含氮的有机化合物，当食品与硫酸和催化剂一同加热消化时，使蛋白质分解，分解的氮与硫酸结合生成硫酸铵。然后再碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以盐酸标准溶液滴定，最后根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

三、仪器

①500mL凯氏烧瓶。

②定氮蒸馏装置。

四、试剂

①硫酸铜。

②硫酸钾。

③硫酸。

④40g／L硼酸溶液。

⑤混合指示剂。

⑥400g／L氢氧化钠溶液。

⑦0.1000mol／L盐酸标准溶液。

五、实验步骤

1、样品的消化

将黄豆粉碎，过40目筛，混匀后准确称取黄豆粉0.30g，小心移入100mL干燥的凯氏烧瓶中(勿黏附在瓶壁上)，加入0.2g硫酸铜、3g硫酸钾及5mL硫酸(每克样品加硫酸15mL)，稍摇匀后，将瓶以450斜支有石棉网的电炉上，先以小火缓慢加热(沸腾的泡沫不超过瓶肚的2/3)，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，直至液体呈蓝色澄清透明后，再继续加热0.5h，完成消化。

待消化液冷至室温后，用蒸馏水干净地转入100mL容量瓶中，并用蒸馏水定容，摇匀，(消化液在临用前再稀释定容)。

2、蒸馏与吸收

连接好微量定氮蒸馏装置，于水蒸气发生瓶内装水至2/3容积处，加甲基橙指示剂数滴及硫酸数毫升，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。检查装置的气密性。

在接收瓶内加入25mL 40g/L硼酸及2滴混合指示剂，将冷凝管下端插入液面以下。准确