2、定量检验

(1)原理鱼体中的组胺经正戊醇提取后，与偶氮试剂在弱碱性溶液中进行偶氮反应，产生橙色化合物，与标准比较定量。

(2)测定：称取5～10g切碎样品置于具塞三角瓶中，加10%三氯醋酸溶液15.O～20.OmL，浸泡2～3h，过滤。吸取1.OmL滤液置于分液漏斗中，加25％氢氧化钠溶液使呈碱性，每次加入3mL正戊醇，振摇5min，提取3次，合并正戊醇并稀释至10.OmL。吸取1.OmL正戊醇提取液于分液漏斗中，每次加3mL 1mol／L盐酸振摇提取3次，合并盐酸提取液并稀释至10.OmL，备用。

吸取1.OmL盐酸提取液于10mL比色管中。另吸取O.00、O.20mL、O.40mL、O.80mL、1.OOmL组胺标准溶液(相当0、4μg、8μg、12μg、16μg、20μg组胺)，分别置于比色管中，各加1mol／L盐酸1mL。样品与标准管各加3mL 5％碳酸钠溶液、3mL偶氮试剂，加水至刻度，混匀，放置10min后，用1cm比色皿，以零管调节零点，于波长480nm处测吸光度，绘制标准曲线。

(3)计算

组胺含量(mg／100g)

式中V——加入10%三氯醋酸的体积，mL；

A——测定时样品组胺的浓度，μg／mL；

m——样品质量，g。

三、斑蝥素

(一)毒素来源和理化性质

斑蝥系鞘翅目地胆科甲虫，又名斑猫、斑蚝、盘毛虫、鸡公虫等，是一种黄、黑横纹的甲壳虫，一般多野生于黄豆田内。莞青系鞘翅目地胆科甲虫，又名青娘子或青娘虫，其虫体呈蓝紫色或青紫色，有金属光泽，一般生活于莞花及蚕豆田内。

斑蝥和莞青体内的毒性成分均为斑蝥素，又称斑蝥酸酐。分子式为C₆H₁₂O₄，结构式如图14—2所示。纯斑蝥素为无色有光泽的斜方小片结晶，熔点218^oC。能升华，升华点为110℃。不溶于冷水，难溶于石油醚，微溶于醇、热水，能溶于丙酮(1∶40)、氯仿(1∶65)、乙醚，易溶于油脂类。斑蝥素加碱处理，即可成为可溶性斑蝥酸盐，但其溶液如经酸化，斑蝥素即可重新析出。

斑蝥素毒性剧烈。斑蝥中毒剂量约为lg，致死量为3g；食人0．6g斑蝥粉可中毒，1.5g能致死；纯斑蝥素O.03g即可引起死亡。

随污染食品摄入后可引起食物中毒。首先引起消化道病变，黏膜坏死。被吸收后可引起肾小球变性、肾小管出血、心肌出血、肝脏轻度脂肪变性。对毛细血管也可产生毒害作用，还可引起神经系统损害和功能障碍。

中毒的主要症状为：15腔咽喉烧灼感、口麻、H腔黏膜发生水泡及溃疡、头晕、头痛、视物不清、IXl肢远端麻木、恶心、呕吐、呕血、腹痛、腹泻、便血，食管黏膜坏死、脱落，孕妇可导致流产。严重者可出现高热、双下肢瘫痪、昏迷和休克甚至死亡。

斑蝥素中毒大多是因为误食而引起。若发现中毒者，应立即进行洗胃，并口服牛乳、蛋清，或口服5～lOmL 10%氢氧化铝凝胶，以保护胃肠黏膜；口服活性炭或盐类泻剂，以减轻毒素的吸收；采用静脉输液，以维持水和电解质平衡；进行对症治疗，防止内脏损害和休克发生。

(三)斑蝥素的检验

取可疑样品粉碎、酸化后，用乙醚或氯仿提取斑蝥素，挥去乙醚或氯仿后，残留物用无水丙酮10～20mL溶解，置冰箱中冷却，如有油脂析出可滤去，挥去丙酮，残留物用5mL石油醚洗涤后备用。可用下列两种方法检验。

①取残渣少许，放在白瓷皿中，加1∶1硫酸2滴，于小火上温热溶解，趁热加入1～2滴对二甲氨基苯甲醛试剂，如有斑蝥素存在，即呈现紫红色。但阿托品同样有此反应，且比斑蝥素更灵敏，需加以注意。

②取残留物少许，放入试管中，加入浓硫酸数滴，加热溶解后，加入数滴邻硝基苯甲醛试剂，再在酒精灯上加热至沸，如有斑蝥素存在，即呈现棕色，在紫外线灯下观察，可见到有鹅黄色荧光。

参考资料：环境中有毒有害物质与分析检测