②标准曲线制作。取每1mL含有100μg的龙葵碱标准溶液O、O.1mL、0.2mL、O.3mL、O.4mL、O.5mL，(相当于O、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg)，分别放入10mL纳氏比色管中，加入1%硫酸溶液至2mL，在冰浴中各滴加浓硫酸至5mL(滴加速度应慢，时间不应少于3min)，摇匀。静置1rain，然后在冰浴中滴加1％甲醛溶液2．5mL，静置90min之后，在分光光度计于波长520nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

③样品测定。取样液2mL放入10mL纳氏比色管中，以下按②自“在冰浴中各滴加浓硫酸至5mL”起依法操作。

(4)计算

式中：c——标准溶液中龙葵碱的含量，mg；

         V₁——测定时取样品提取液的体积，mL；

        V——样品提取后定容总体积，mL；

        m——样品质量，g；

       100——换算系数。

四、棉酚

(一)棉酚的来源与分布

我国种植的棉花属于陆地棉及草棉，属锦葵科。棉籽可榨油，经碱炼后，是一种适于食用的植物油。棉籽中含有O.15％～2.8％游离棉酚。冷榨棉籽油时，大部分棉酚转入棉籽油中，可高达1％～1.3％。因此食用冷榨棉籽油时，可能会发生中毒。

棉酚系萘的衍生物，分子式为C₃₀H₃₀O₈，相对分子质量为518，该化合物在结构上有3种形式，即：醛、烯醇、醌式互变异构。棉酚易溶于中等极性的有机溶剂，如乙醚、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等，不溶于水和己烷等。

(二)毒性与危害

棉酚在冷榨棉籽油或棉籽饼中多呈游离状态存在，故称为游离棉酚。游离棉酚对大白鼠经口LD₅₀为2.5g／kg体重。棉籽油中含O.02％游离棉酚对动物健康无影响，O.05％对动物有危害，高于O.15％可引起动物严重中毒。棉酚对心、肝、肾等实质器官以及神经、血管组织、生殖系统均有毒性。有报告显示，食用棉籽油和榨油后的棉饼可引起中毒，在大量食用时常致急性中毒。长期少量食用，也有慢性中毒的报道。

摄入一定量的棉酚后，一般在2～4天内发病。发病的缓急、症状的轻重与食用方法和数量有关。棉饼经炒熟后食用，中毒症状较轻，一般食后稍有头晕、头痛、便秘。若食用生棉籽饼，则可在食用后4h～4天内出现头痛、眩晕、疲乏无力、精神萎靡、食欲不振、恶心、胃部烧灼感、呕吐、腹部不适、腹痛、腹泻或便秘，甚者胃肠出血，以后四肢发麻、烦躁不安、流涎、黄疸、肝大压痛，也可出现嗜睡、昏迷、抽搐。部分患者可出现心动过缓、血压下降、心力衰竭、肺水肿及肝、肾功能不全。

气温升高可诱发毒性症状发作，故若在夏季大量进食，有的患者可出现高热、疲劳、口渴或少汗、皮肤发红、瘙痒、针刺与烧灼感、口唇及肢体麻木、气急、胸闷、心慌，部分患者有头晕、头痛、眼花、流泪的症状。上述症状在日光下更为严重，并可能伴有面部浮肿和心烦意乱。棉酚引起的慢性中毒，主要表现为低血钾症。

防止棉酚中毒的最有效方法是不食用冷榨棉籽油或毛棉籽油，以防食入过量棉酚而引起中毒。对中毒者予以催吐、洗胃及导泻，同时采用对症治疗，以减轻毒性危害。

(三)棉籽油中棉酚含量的测定

1、三氯化锑法测定总棉酚含量

(1)原理样液中的棉酚和三氯化锑在氯仿中生成红色化合物，颜色的深浅与其含量成正比。通过比色求出棉酚含量。

(2)测定

①标准曲线制作。吸取10肛g／mL棉酚标准溶液O.O、O.5mL、1.OmL、1.5mL、2.0mL、2.5mL，移入10mL比色管中，加入5滴醋酸酐、5mL饱和三氯化锑溶液，加入氯仿至刻度，混匀，放置10min后，于波长510nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

②样品测定。称取棉籽油O.50g，用30mL氯仿溶解后，移入分液漏斗中，加入2～5mL HCl(视样品脂肪含量定)，充分振摇，放置过夜，弃去酸液。如果第一次加入HCl量未能充分去除脂肪，则需要再加入HCl溶液去除氯仿层的脂肪。将氯仿通过无水硫酸钠柱收集于50mL容量瓶中，并用氯仿洗涤分液漏斗及无水硫酸钠柱，洗液集中于容量瓶中，用氯仿定容。

吸取1mL氯仿提取液，置于10mL比色管中，按标准曲线制作的步骤测定吸光度，从标准曲线中求出棉酚含量。

(3)计算

2、紫外分光光度法测定游离棉酚含量

(1)原理棉酚在波长378nm处具有最大吸收峰，峰高与含量在一定范围内符合比尔定律，可用紫外分光光度计测定。

(2)棉酚标准溶液精确称取棉酚5mg，用70%丙酮水溶液定容至50mI。制得每毫升含棉酚100μg的标准溶液。

(3)测定

①标准曲线的制备。精确吸取O.1mg／mL棉酚标准液0.O、O.5mL、1.0mL、1.5mL、2.OmL和2.5mL，分别移人10mL比色管中，用70％丙酮溶液稀释至刻度，摇匀。10min后于波长378nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

②样品测定。准确称取0.5000g棉籽油于100mL具塞锥形瓶中，加入10mL 70％丙酮溶液和玻璃珠3～5粒。在振荡器中振荡30min，然后在冰箱中放置过夜。将上清液过滤于10mL容量瓶中，用70％丙酮溶液稀释至刻度，然后按标准曲线绘制操作进行，求得吸光度。从标准曲线中查出棉酚含量，并按下式计算样品中棉酚含量。

式中：m——从标准曲线中查得相当于棉酚的量，μg；

         m——样品质量，g。

参考资料：环境中有毒有害物质与分析检测