(二)常见生物碱的检测

1、原理

样品中的生物碱，在弱碱性或碱性条件下，用有机溶剂提取后，提取物用各种沉淀剂及显示剂试验，呈各种颜色反应，可据此作为各种生物碱的一般定性。

2、试剂配制

①甲醛硫酸溶剂：浓硫酸3mL，加入甲醛3滴。

②碘化钾试剂：称取碘1.27g，溶于含有碘化钾2g的5mL水中，用水稀释至10mL。

③碘化汞钾试剂：称取0.68g二氯化汞，溶于30mL水中，另称取碘化钾25g，溶于5mL水中，两液混合后，用水稀释至100mL。

④磷钨酸试剂：称取lOg钨酸钠，溶于30mL水中，加入25％磷酸溶液5mL。

⑤碘化铋钾试剂：称取碘化铋1.6g，碘化钾3g，盐酸O.35mL，加水至100mL。

⑥磷钼酸试剂：称取磷钼酸钠10g，溶于20mL HNO₃中，加水至100mL。

3、测定

称取适量检样，加入200mL 50%乙醇，加入10％酒石酸酸化，于回流装置中回流2h，过滤，滤液水浴蒸发至糖浆状。加入95％乙醇溶液溶解，过滤，滤液在水浴上蒸发至糖浆状，加50mL乙醇溶解，过滤。滤液中加入10％氢氧化钠溶液至呈碱性，移入分液漏斗中，加乙醚振摇提取，分出乙醚层，置于蒸发皿中，水层移人另一分液漏斗中。将乙醚挥发得残渣，用20mL水及1滴HCl溶解残渣得检液甲。将上述分出的水层在分液漏斗中加入固体氯化铵使产生氨臭。加入氯仿一无水乙醇混合液(9：1)，振摇提取，分出氯仿层移人蒸发皿中，使氯仿挥发得残渣。溶解残渣置于20mL水中，加1滴盐酸，得检液乙。

各取检液甲、乙3滴，分别置于白瓷反应板凹孔内，然后分别加入试剂④～⑥(沉淀剂)1～2滴，如加入4种以上的沉淀试剂，均能产生沉淀，即可认为有生物碱存在。

各取上述检样的乙醚或氯仿提取液4mL，置于小蒸发皿内，于水浴上蒸发至干，分别滴加显色剂、浓硫酸、浓硝酸或试剂①～③，观察反应颜色，按表14—3方法进行定性，可查出一些常见的生物碱。

(三)龙葵碱的测定

1、定性检验

(1)试剂配制

钒酸铵溶液：称取1g钒酸铵，溶于1000mL1∶1 H₂SO₄中。

硒酸钠溶液：称取O.3g硒酸钠溶于8mL水中，然后加入6mL浓H₂SO₄，混匀。

(2)方法取适量样品捣碎后榨汁，放入烧杯中，残渣用水洗涤，将洗液与汁液合并，取上清液用氨水碱化，蒸发至干。残渣用95％热乙醇溶液提取2次，过滤，滤液再用氨水碱化使马铃薯毒素沉淀，过滤得残渣。

取少量残渣加入1mL钒酸铵溶液，呈现黄色，以后逐渐转变为橙红、紫、蓝、绿色，最后颜色消失。

取少量残渣加入1mL硒酸钠溶液，温热，冷却后呈紫红色，后转为橙红、黄橙、黄褐色，最后颜色消失。将马铃薯发芽部位切开，如在出芽部位分别滴加浓硝酸和浓硫酸，显玫瑰红色者则综合鉴定为马铃薯毒素。

2、定量分析

(1)原理龙葵碱在稀硫酸中与甲醛溶液作用生成橙红色化合物，在一定范围内，颜色的深浅与龙葵碱苷含量成正比。可用分光光度计在波长520nm处测定。

(2)试剂龙葵碱标准溶液，精确称取O.1000g龙葵碱，以1％硫酸溶液溶解，并定容至100mL。此溶液每1mL含龙葵碱1mg。

(3)测定

①样品提取。取捣碎的马铃薯样品20g，置于250mL烧杯中，加入95％乙醇溶液100mL、冰乙酸3mL，混匀。将溶液经滤纸滤入索氏提取瓶中，残渣用20mL乙醇洗涤2次，将洗脱液合并到提取瓶中，再将滤纸放入提取器内，连接好索氏提取器各部分，于水浴中加热，控制温度为80～90℃，提取16h以上。将乙醇溶液移入250mL蒸馏瓶中，连接好冷凝装置，在水浴上回收多余的乙醇溶液，当蒸馏瓶中溶液剩余10～15mL时，停止蒸馏。

将蒸馏瓶中的溶液倒入蒸发皿中，用10～20mL乙醇分多次洗涤蒸馏瓶，将洗液合并于蒸发皿中，在水浴上挥发近干。用5％硫酸溶液溶解残渣，过滤，然后用浓氨水调至中性，再加1～2mL浓氨水，使pH值至10～10.4，在80℃水浴加热5min，使沉淀完全。冷却后置冰箱中过夜，离心，倾去上清液，以1％氨水洗至无色透明为止，将残渣用1％硫酸溶液溶解并稀释至10mL。

参考资料：环境中有毒有害物质与分析检测