北方伟业计量集团有限公司
组织蛋白提取法
1.PBS灌注小鼠,取脑,每个1.5ml的EP管装半只脑,先放在干冰上,然后-80℃保存;
2.取出脑组织,称重,用RIPA buffer在冰上洗1次,按照每100mg加1ml RIPA buffer(+100× PMSF+100× PIC)的比例,加入相应体积的RIPA buffer(一般大脑为200mg,故一般加入2ml RIPA buffer);
3.在5ml tube管中剪碎脑组织,放在冰上,用电动匀浆器匀浆,避免起泡沫和发热,(可选步骤:将得到的匀浆液用液氮反复冻融3次), 各组织裂解时间要一致,冰上放置30min;
4.将5ml tube管中的裂解液分装到两个1.5ml的EP管中,4℃,12000 rpm离心30min;
5.每管取上清600ul,两管混合在一起(1.2ml),轻轻颠倒混匀后,分装为每管300ul,共四管,-80°保存;
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