我国是棉花种植大国，棉籽年产量达1000万t以上，压榨后所得棉籽饼产量高达600万t以上。棉籽粕的粗蛋白含量为35-40%，营养丰富、价格低廉，是畜禽、水产动物饲料源蛋白重要来源之一。然而，由于棉籽粕中含有游离棉酚，长期摄食含有棉酚的饲料，游离棉酚会蓄积在动物体内，影响人类食用安全。有研究表明，人类食用含有棉酚的食物后可引起低血钾症、肝脏和肾脏损伤，甚至可造成女性月经紊乱、闭经，男性不育。上世纪六十年代发生在山东高密、河南夏邑及河北邢台的男性不育现象，经调查发现与该地区长期食用土榨棉籽油有关。对于游离棉酚在食品中的残留限量，世界卫生组织、联合国儿童基金会建议不超过600mg/kg，美国FDA规定不超过450mg/kg，我国规定食用植物油中不超过200mg/kg。

关于植物性食品或饲料中游离棉酚检测方法已有较多报道；动物性食品中游离棉酚检测方法仅见崔晓明等研究报道，该方法采用高效液相色谱法（HPLC）检测了畜肉中游离棉酚含量，但其提取溶剂剂量相对较多，处理过程相对耗时。文献报道检测动物组织中游离棉酚仍多是采用饲料中游离棉酚检测方法，前期样品处理过程比较繁琐，使动物性食品游离棉酚检测效率大大降低。相对禽畜肉，鱼肉中脂肪含量较低，无需繁琐的去脂肪过程。本研究建立了鱼肌肉中游离棉酚的高效液相测定方法，样品处理过程相对简单，准确度高，以期为鱼肉中棉酚安全评价提供技术支持。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物

鲤鱼幼鱼，购于郑州某养殖场，体质量50-60g，流水养殖，水温24-26℃。

1.1.2药品与试剂

醋酸棉酚标准品（含量≥98.0%），购于大连美仑生物技术有限公司。甲醇、乙腈和磷酸均为色谱纯。

1.1.3实验仪器

高效液相色谱仪Agilent1260，Eppendorf高速离心机，ZG圆形水浴氮吹仪，XHF-DY内切式均浆机。

1.2实验方法

1.2.1色谱条件

高效液相色谱仪为Agilent1260，色谱柱为AgilentTC-C18（长度250mm，内径4.6mm，粒径5μm）；流动相为甲醇:磷酸=85:15(v:v)，磷酸浓度0.01mol/L，pH值2.43；紫外检测波长235nm，柱温40℃，流速1.0mL/min，进样体积20μL。

1.2.2磷酸溶液配制

准确量取580μL85%色谱级磷酸，用超纯水定容至1L，磷酸浓度0.01mol/L，测得pH为2.43。

1.2.3不同溶剂溶解游离棉酚稳定性

纯丙酮溶液：准确称量醋酸棉酚0.0102g，用纯丙酮定容至50mL，超声波超声30min，配置成200μg/mL的棉酚标准储存液，再利用纯丙酮稀释成10μg/mL的棉酚标准工作液。丙酮-水溶液：准确称量醋酸棉酚0.0102g，用70%丙酮水定容至50mL，超声波超声30min，配置成200μg/mL的棉酚标准储存液，再利用70%丙酮水稀释成10μg/mL的棉酚标准工作液。

丙酮-磷酸溶液：准确称量醋酸棉酚0.0102g，用70%丙酮磷酸定容至50mL，超声波超声30min，配置成200μg/mL的棉酚标准储存液，再利用70%丙酮磷酸稀释成10μg/mL的棉酚标准工作液。稳定性测定：每天上午10:00在1.2.1的色谱条件下分别测定纯丙酮、70%丙酮水、70%丙酮磷酸三种不同的游离棉酚溶液的响应值峰面积，连续测定5天后分别比较它们的变异系数(C·V%)，以此衡量各种溶液的稳定性。

声明：本文所用图片、文字来源《食品科学》，版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除。