因环境污染、药物及各种辐射等因素影响，不孕不育症日益受到关注，精子质量和数量下降是男科常见病，不孕不育中男方因素占50%，生精障碍为其主要原因，亟待研发一种天然低毒的改善生精障碍新药。吲哚-2，3-二酮（indole-2，3-dione，isatin，又名2，3-吲哚醌）是一种天然海洋活性物质，结构式见图1。前期证明其有抗衰老、抗肿瘤、抗菌和抗病毒等作用。吲哚-2，3-二酮在大鼠的附睾中浓度高于其他组织80~100倍，该特异分布提示其对哺乳动物的生殖有重要作用。本研究测定吲哚-2，3-二酮对醋酸棉酚诱导生精障碍模型小鼠的影响。

药品与试剂

吲哚-2，3-二酮（C8H5NO2），相对分子量为147.13，纯度98%，由青岛大学医学部药学院提供；醋酸棉酚（C32H34O10），相对分子量为578.61，纯度99%，购自陕西盘龙制药集团有限公司，批号：20101001；生理盐水，购自山东华鲁制药有限公司，批号：B10102904；苏木素-伊红（HE）染色试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司。

实验动物昆明种小鼠40只，一级，雄性，6周龄，体重18~22g，由青岛市实验动物和动物实验中心提供，生产许可证号：SCXK（鲁）20090007；清洁级环境饲养7~10d，控制室温（20±2）℃，湿度50%~60%，每日照明10~14h，灭菌处理后的饮用水和全价营养饲料喂养，每周更换1~2次垫料，定期清洗消毒笼具。分组与给药健康雄性小鼠40只，随机分为五组（n=8）：空白对照组、模型对照组和吲哚-2，3-二酮25、50、100mg·kg-1组，实验剂量参照文献的方法及预实验确定。受试动物前隔夜禁食，不禁水。空白对照组小鼠每日灌胃生理盐水0.2mL；其余各组按文献[8]方法并加以改良制备生精障碍模型，小鼠醋酸棉酚20mg·kg-1灌胃连续处理30d，造模。造模同时分别给予吲哚-2，3-二酮25、50和100mg·kg-1，灌胃给药连续30d，每日给药1次。

吲哚-2，3-二酮对生精障碍模型小鼠精子及睾丸发育的影响将小鼠颈椎脱臼法处死，摘取双侧附睾置于盛有磷酸盐缓冲生理盐水1mL中剪碎，再加1mL稀释，轻轻吹打后，静止3~5min后吸取精子悬液。显微镜下观察精子活动率。再在小烧杯中加入4%甲醛0.5mL混匀，用微量吸液器吸取精子稀释液10μL滴入血球计数板，计数5个中方格中的精子数×109，即为每升精液中的精子数（个·L-1）。取小鼠睾丸，剥离其附睾和表面脂肪，分别迅速放入装有Bouin液的广口瓶中固定24h，切片、脱水、浸蜡、包埋、HE染色，光学显微镜下观察小鼠睾丸的精原细胞、初级精母细胞、精子细胞的数目。吲哚-2，3-二酮对生精障碍模型小鼠生育的影响动物分组及给药同上。于灌胃第31日，在夜间安静环境中，按雌雄1∶1同笼，连续8d，即2个性周期，在雌鼠同笼后的15~21d均处死，记录怀孕鼠数及孕鼠平均胎数。

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