棉花是一种重要生活资料，广泛地分布于全国各地，作为副产物之一的棉籽大部分用于榨油。棉籽油是从棉花种子中提炼的食用油，已成为我国食用油中重要的一部分，并且是我国传统四大食用植物油之一。根据美国农业部发布的最新数据，2016年中国棉籽油产量为144.7万吨，是全球最大棉籽油生产国。在棉籽油生产加工、食用过程中，棉籽中的内源性物质－棉酚成为各方关注的重点。棉酚按其存在方式分为结合棉酚和游离棉酚2种。棉酚在植物体内主要以游离棉酚方式存在。据报道，游离棉酚可引起低血钾症、引起胃肠炎、神经系统的机能发生紊乱，对动物的心、肝、肾均具有损害作用，还具有生殖毒性，具有最显著的是抗生精作用。

目前我国规定了棉籽油中游离棉酚的限量≤0.02%，在全世界的许多国家也规定了植物性食品中游离棉酚的含量限量，并制定了植物性食品中游离棉酚检测的国家标准(GB/T5009148-2014)。由于棉酚的化学结构中含有较多的酚羟基及醛基，导致其化学性质不稳定，有一些文献报道棉酚在光照条件下容易发生缩醛互变异构体。本课题组前期实验发现，棉籽油中游离棉酚在常温下极易降解(30d内降解80%以上)。经质谱仪检测，推测其主要游离棉酚降解产物结构为四甲氧基棉酚。对新疆24批市售棉籽油进行检测，均未检测到游离棉酚，但20批油样中检测到游离棉酚降解产物。棉酚的毒性虽然已被证实，但降解产物的毒性却未见报道。棉酚降解产物的存在，有可能是棉籽油潜在的安全隐患，同样可能对消费者的健康造成危害。故本次实验采用体外细胞实验初步研究棉酚降解产物四甲氧基棉酚的毒性，为今后全面评价棉籽油的安全性提供部分实验依据。

1材料与方法

1.1试药

自制棉籽油样品;主要游离棉酚降解产物四甲氧基棉酚，由制备型液相制备所得。

1.2细胞来源

小鼠GC-2细胞株(小鼠精母细胞株)购买于广州吉妮欧生物科技有限公司，传代次数为4代。

1.3仪器

电子分析天平:型号TB-114，北京赛多利斯仪器系统有限公司;旋转蒸发仪:型号N-1001，上海爱朗仪器有限公司;循环水式真空泵:型号SHB-3，郑州长城科教仪器有限公司;数显恒温水浴锅:型号HHS，金坛市医疗仪器厂;半制备色谱柱，YMC-PackODSA(250×20mm，5μm);二氧化碳培养箱:型号311，美国Forma集团公司;生物安全柜:型号HFsafe1200，北京申力科学仪器有限公司;倒置显微镜:型号TE2000-U，日本尼康英士特公司;酶标仪:型号MultiskamGO1510，Thermo公司;低温离心机:型号Sigmaz-16k，Theremo;立式自动压力蒸汽灭菌器:型号ZDZX-30KBS，上海审安医疗器械厂;电子天平:型号BP221S，北京赛多利斯天平有限公司;低温冰箱:型号MDF-U333，三洋医用生物电子有限公司。

1.4试剂

甲醇，分析纯，上海市富宇精细化工有限公司;甲醇，色谱纯，FisherChemical;超纯水，由新疆医科大学分析测试中心提供;MTT，上海伊卡生物技术有限公司;DMSO，上海市富宇精细化工有限公司;0.25%胰蛋白酶溶液，澳洲Hyclone公司;1640溶液，澳洲Hyclone公司;胎牛血清，以色列BI公司。

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