急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)／急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)是由各种非心源性的内外致病因素如由肺炎、肺外感染、严重创伤、休克、吸人有毒气体、胃食管反流、败血症等导致以肺毛细血管通透性增加、肺水肿、严重的低氧血症为特征的急性、进行性呼吸衰竭。目前关于ALI／ARDS发病机制的研究及临床治疗已取得相当的疗效，但其发病率及死亡率仍然很高。一项前瞻性流行病学研究估计，在美国每年约有190000成年ALI／ARDS患者。

全氟异丁烯(perfluoroisobutylene，PFIB)是在工业及日常生活中广泛应用的聚四氟乙烯等多聚氟碳化合物的燃烧产物，同时也是工业生产上聚四氟乙烯的重要副产物之一。它无色无味，易穿透防毒面具，毒性大约为光气的10倍。PFIB主要通过呼吸道吸人中毒，导致以通透性肺水肿为特征的AU。PFIB在火灾事故中大量产生，由于其难防难治的一些特点，所以，尽管进行了积极的抢救，但仍然造成了很多人员的伤亡，这就给临床救助带来了很大的困难。Au的重要发生机制是炎症细胞的激活和炎症因子的释放。该机制同样也是PFIB造成ALl的重要机制。此外，较前的一些研究显示，在PFIB吸人性的肺损伤中，蛋白酶一抗蛋白酶系统的失衡也占有很大一部分作用。其中主要的蛋白酶来源于中性粒细胞在肺内聚集和扣押，并活化后释放的蛋白分解酶类主要组分是中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophilelastase，NE)o抑肽酶(aprotinin)是一种非特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂，其长期以来用于急性胰腺炎、术后出血的治疗。

2009年Dana等研究称，蛋白酶抑制剂抑肽酶可有效减轻芥子气引起的肺损伤，同时稍前的一些研究也显示，抑肽酶还可减轻机体炎症反应，抑制TNF—et、白细胞介素一6(IL一6)、NF—KB等的释放及改善中性粒细胞的趋化性，具有明显的抗炎症介质作用。故本文以有毒气体PFIB导致的ALI大鼠模型为研究对象，观察抑肽酶对ALI的治疗作用并探讨其作用机制，同时也为PFIB中毒后提供有效的药物治疗及依据。

1材料与方法

1．1实验动物及主要器材

成年雄性SD大鼠40只，体质量180～230g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，动物实验前适应性喂养1—2d，自由饮食饮水。抑肽酶购自美国Sigma公司，货号A一1153，大鼠肺泡灌洗液(BALF)BCA蛋白浓度测定试剂盒与NE、血清TNF一0、IL一6的ELISA测定试剂盒均购于北京方程生物公司(201308)。NF—KB的抗体来自美国Sigma公司，B—actin抗体来自北京中山生物技术有限公司。

1．2ALI动物模型建立

成年雄性SD大鼠40只，根据体质量随机分成五组，对照组、Au组、低剂量抑肽酶组(低剂量Apro组)、中剂量抑肽酶组(中剂量Apro组)、高剂量抑肽酶组(高剂量Apro组)，每组8只。PFIB购自上海有机氟材料研究所，纯度为98％，其浓度通过气相色谱仪(SQ一204型，北京)分析测定。实验大鼠全身暴露于自制PFIB动态吸人染毒系统5minl6J。每次染毒8只大鼠，各组动物数均等。本次实验PFIB染毒剂量约为290mg／m。，染毒5min。在大鼠染毒后30min腹腔注射给药，抑肽酶剂量分别为5、15、30mg／kg。染毒24h后结束实验。

1．3血清TNF一仅、IL一6测定

以10％水合氯醛0．4mL／100g麻醉大鼠，腹主静脉取血5mL左右。4℃离心8min(3000r／rain)，取上清液用ELISA方法测定TNF—o、IL一6含量。所有测定均严格按照北京方程生物公司所提供的试剂操作说明书进行。

1．4BALF总蛋白含量测定

打开胸腔，小心剔除肺外组织，分离气管，结扎右肺，以5mL生理盐水灌洗左肺，反复3次，回收量约为4mL，40C离心8min(3000r／rain)，取上清液用BCA方法进行总蛋白测定。即先进行标准测定：将0．1mL标准品与2mL工作溶液混合。再进行微板测定：将25待测样本与200L工作溶液混合。在酶标仪37℃下反应30min，测定562nm光密度(oo)值，绘制标准曲线并计算蛋白浓度。

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