(4 )Na₂SO₄饱和溶液:称Na₂SO₄·10H₂O(化学纯)165g,溶于1L水中。

(5)硫酸锌溶液[p(ZnSO₄·7H₂0)=50g·L^-1]:称取ZnSO₄·7H₂O(化学纯)50g，加水溶解，并稀释至1L;

(6)乙醇[ψ（C₂H₅OH) = 85%及80%〕:取无水乙醇(分析纯)85 mL加水稀释至100 mL,即为80%乙醇溶液。取无水乙醇80 mL，加水稀释至100 mL，即为80%乙醇溶液。

(7)草酸钠(Na₂C₂O₄)试剂(分析纯)；

(8)亚甲基蓝水溶液:称亚甲基蓝1.00g溶于水中，加水稀释至100 mL；

(9)葡萄糖标准溶液[p(C₆H₁₂O₆=2000mg·L^-1]:称取干燥的葡萄糖(C₆H₁₂0₆，优级纯)0.2000 g用少量水溶解后。洗入100 mL容量瓶中用水定容。

4、操作步骤

(1)待测液制备

①水提取法:清除新鲜水果、蔬菜样品外来污染的杂质，尽可能快地磨细或切碎，混匀，称取样品25.00g～50.00g(含糖约2.5 g),置高速组织捣碎机中，加适量水后捣碎(或置研钵中加少量纯石英砂共同研磨)，然后小心移入250mL容量瓶中，加水至约150 mL。或风干已磨细的样品则可称取0.500g～5.00g，洗入250 mL容量瓶中，亦加水至约150mL。然后加入粉状CaCO₃ 0.5g～1.5g中和样品中的酸度(防止浸提过程中蔗糖水解)，摇动1 min,置于80℃水浴中保温浸提0.5h，其间摇动数次以利糖分浸提完全。冷却，滴加中性乙酸铅溶液(试剂2)至产生白色絮状沉淀(约2 ml～5 mL)，充分摇动混合，静置15 min，再滴加几滴中性乙酸铅溶液于上部清液中检查是否沉淀完全。如果还有沉淀形成。再摇动，静置，直至不产生白色絮状沉淀为止，用水稀释定容。用干滤纸过滤。加入足量固体草酸钠到滤液中，使铅沉淀完全，再用干滤纸过滋，再加少许固体草酸钠到滤液中，检查铅是否沉淀完全。确认无铅后，滤液待用。

②乙醇提取法:称取剪碎、混匀的新鲜植株样品(含大量淀粉或菊糖的样品)25.00g或干样0.500g～5.00g，放入400 mL烧杯中，加入85%乙醇150 mL浸泡过夜(另测样品水分)，倒入高速组织捣碎机的杯中捣碎，再倒回原烧杯中，用80%乙醇将杯壁上的样品洗净，一同倒入烧杯中，过滤入250 mL容量瓶中一，再用80%乙醇少量多次洗涤残渣，直至滤液无糖反应为止。最后以80%乙醇定容。吸取乙醇浸出液25.00 mL～50.00 mL(吸取量视含糖量与方法而定)，放入瓷蒸发皿中，如溶液呈酸性，用固体CaCO₃中和，在60^oC～80℃水浴上蒸干乙醇，后加入少量无CO₂水，用橡皮头玻棒将干物质洗下，边搅边加入Ba(OH )₂饱和溶液2mL～10mL，至溶液呈淡黄色(碱性)，此时絮状蛋白质沉淀物浮在液面。加入酚酞指示剂1滴，在不断搅动下加入硫酸锌溶液(试剂5)以沉淀过量的Ba²⁺，直到溶液呈微红色时为止。过滤入50mL容量瓶中，用少量水洗涤沉淀后定容，待测。

(2)还原糖测定待测液呈中性或接近于中性，其滴定步骤如下:

约测:准确吸取费林试剂(A)和(B)各5 mL或12.5 mL或吸取混合费林试剂10 mL或25mL)，放入250 mL三角瓶中，由滴定管加入待测液约15mL,置在石棉网上酒精灯加热煮沸，趁沸继续滴加待测液，滴加速度约为10s～15s之内加入1mL，直至溶液蓝色即将消失，加入亚甲基蓝指示剂3滴，继续滴加待测液，直至蓝色褪尽为止，记下待测液的用量(mL)。

密滴定:准确吸取费林试剂(A)和(B)各5 mL或12.5 mL(或吸取混合费林试剂10m或25mL，放入250 mL三角瓶中，加入待测液，其用量比约测时滴定量约少0.5mL～1.0mL,置在石棉网上加热，使之2min内沸腾，维持沸腾2 min后，加入亚甲基蓝指示剂3滴，再逐滴地加入待测液，直至蓝色褪尽。前后总沸时间为3 min。准确记下待测液的消耗量(V₁)，待测液的消耗量须在15mL～50mL范围内(含糖量近50mg)，否则应增加或减少称样量，重新制备待测液。

(3)费林试剂的标定

同上操作条件，用葡萄糖标准溶液也分“约测”及“标准测定”两步进行。准确记下消耗标准糖液用量V₀（测定3次平均值）。

5、结果计算

式中:P——精标准溶液浓度，mg·L^-1;

Vo——滴定10 mL费林试剂所消耗标准葡萄糖液的量,mL;

V₁——滴定10mL费林试剂所消耗待测液的量,mL;

V——待测液的总体积,mL;

10^-3——将mL换算成L的系数;

m——样品质量,g。

6、注意事项

(1)检验糖方法:于白色点滴板的孔穴中加a-萘酚乙醇溶液2滴和浓H₂S0₄10滴，混匀，加入待检的淋洗液1滴,1min后如无红圈出现，证明糖已洗净。

(2)还原糖与碱性酒石酸铜试剂反应速度较慢，必须在加热至沸的情况下进行滴定。为了防止烧伤及便于滴定操作，可于滴定管尖部加接一弯形尖管，弯形尖管规格及安装如图39.1所示。并戴上隔热线手套操作。

(3)无色的还原型亚甲基蓝极易被大气中的0₂所氧化，恢复原来的蓝色，故整个滴定过程中兰角瓶不能离开灯火，使瓶中的溶液始终保持沸腾状态，液面覆盖水蒸汽，不与空气接触。

（二）铜还原碘量法 (半微量法)

1、方法原理

夏费-索姆吉试剂与还原糖作用生成Cu₂O沉淀，将沉淀用H₂SO₄酸化时，Cu₂O即溶解成Cu⁺。而夏费-素姆吉试剂中的KIO₃与KI在酸化时生成I₂:

KIO₃+5KI+3H₂SO =3K₂S0₄+3H₂0+3I₂

试剂中的KIO₃是定量加入的，所以生成的I₂也是一定量的。生成的I₂与Cu⁺发生氧化还原反应，消耗一部分I₂。

溶液中与Cu⁺反应后所剩余的I₂以淀粉为指示剂，用Na₂S₂O₃标准溶液滴定。

在测定同时做空白标定，以水代替糖试液，由空白标定消耗的Na₂S₂O₃毫升数减去实测待测液消耗的Na₂S₂O₃毫升数，查表39.1即得待测液中还原粮的毫克数。本方法适用于含糖少的蔬菜、牧草等样品。

参考资料：土壤农业化学分析方法