北方伟业计量集团有限公司
在当前的食品检测工作中,微生物检测是重中之重,为了获得更为精准的食品安全检测结果,多种食品检测技术在不断发展,本文主要对核酸探针检测技术进行分析,此项技术能够在短时间内找到食品内部存在的有毒物质,通过对该技术的应用分析,希望为更多食品检测工作提供参考建议。
1前言
微生物泛滥不仅会出现多种致病菌,更会产生严重的食品安全事故,严重时还会威胁人们的生命安全。核酸探针检测技术不仅具有极高的精准度,更能降低食品检测经费与时间,便捷的检测方式使其得到广泛应用并迅速发展。
2核酸探针基本概述
对核酸探针这一全新检测方式加以分析,此种检测方式的主要部分为RNA探针,RNA探针带有指示标记,能够与被检测食品核苷酸序列的一段单链cDNA或是cRNA分子相互结合。在检测过程中,主要以特异性cDNA、cRNA与人工合成的寡核苷酸探针为主。核酸探针应用范围较为广泛,由于RNA为单链分子,在检测工作中,能够与被检测食品靶序列迅速反应,此类杂交反应效率较高,具有较为显著的应用效果。
3核酸探针的制备工作
在食品检测工作中,借助基因检测方式可以了解样品的位置与序列。此类食品检测方式,能够在探针辅助下,在最短时间内得到不同被检测食品的基因信息,并判断基因信息来源是否相同。要想确保检测工作的顺利开展,应确保核酸探针充分发挥作用。在核酸探针制备工作中,应重点关注以下2项内容。第一,应根据所选择食品,借助交叉反应,对其中变化较为显著的核酸片段进行分析。第二,应在制备前,明确食品内部标记物,对常见标记物进行分析。在当前食品检测工作中,主要通过32P、125I以及35S几种同位素进行分析,并以此为基础,进行核酸探针制备工作。
4核酸探针在当前食品检测工作中的具体应用
4.1应用于DNA与RNA为靶向检测方式
在食品检测工作中,重点应关注以下3项指标。第一,菌落总数检测工作。第二,大肠杆菌群和沙门菌的检测工作。第三,霉菌、酵母与毒素的检测工作。在这些检测工作中,细菌来源种类多样化。在具体检测工作中,需结合DNA遗传序列,开展检测工作。并在检测过程中,遵循生物特异性,对其中的DNA序列进行分析与对比,进而设计出合理的检测方式。其次,以RNA为靶向目标的检测试验。此种检测方式,多以AccuProbe基因为探针,在检测工作中借助荧光物质,将标记特异性单链作为检测探针,应用此种检测方式,能够与待测细菌中的核糖体形成RNA互补,进而形成相对稳定的DNA与RNA杂交体。在具体检测工作中,应选择适合检测样品的试验试剂,借助试剂将多余探针去除。在试验后续阶段,可以通过发光仪器设备,做好杂交标记工作。借助核酸探针,以RNA为靶向目标的检测方式相对简单,检测用时较短,检测正确率较高,应得到重视与推广。
4.2核酸探针应用于水产品检测工作
随着食品种类不断增加,核酸探针检测技术已经得到较为广泛的应用,普遍应用于基因测序、食品检测工作中。在以往的检测工作中,显微镜检测方式存在较大误差,难以保证检测结果的精确度。再加上不规范操作的影响,或是使用检测试剂不合理,缺乏检测经验,这些因素都会影响检测结果。因此,可以借助核酸探针检测方式,弥补传统检测方式的不足,应用科学检测原理,不断提升检测结果的可信度。例如,在水资源与水产品检测工作中,应以核酸检测为基础,对导致腹泻的大肠杆菌进行检测,在实际检测工作中,可以借助ST基因片段,判断水产品中是否含有此类物质。为确保相关水产品质量与安全,应在水产品销售前,对水产品进行检测。在水产品检测工作中,可以应用核酸探针检测方式,对水产品存在的过量微生物、细菌以及蠕虫进行检测与分析。结合核酸探针检测所得技术数据,明确水产品中的生物特点,才能有效鉴别其中的有害成分,最终提升水产品检测质量。要想维护水产品市场稳定发展,为消费者提供更为优质的产品,势必要做好水产品检测工作。
4.3核酸探针应用于肉制品检测
在肉制品检测工作中,常会检测出牛巴贝斯虫,此种寄生虫具有较高传染性,牛巴贝斯虫病为原虫病,多由泰勒焦虫感染所致。由于此类寄生虫寄生于病畜血细胞中,其检测难度较大,为保证食品安全,禁止病畜出现在市场中,应借助DNA探针检测方式,以核酸探针检测为主,并结合皂素处理方式,解决不能回收全部虫体的问题,进而提升核酸探针检测的有效性和灵敏度。首先,在检测工作中,应对畜禽血样进行收集与处理,将血样置于37℃水浴处理,确保血样融化。吸取100μL血样,在血样中加水至500μL,冰浴10min,以3000r/min进行离心处理,离心时间10min。当血样中的变性血红蛋白逐渐沉淀后,将上述被测物质转移至另一离心管中。与此同时,应对正常畜禽血液进行处理,借助健康畜禽白细胞对被测样品进行冷藏与稀释。每个稀释后的血样,相当于原血样中的50μL。对这一血样加以分析,稀释过后的病畜血样虫量较大。因此,为保证检测结果精确度,在本次检测工作中,最终确定检测稀释度为500μL。
在血样处理工作中,应采取以下3种方式,对血样进行处理。
(1)皂素处理方法,在上述血样中加入皂素,将皂素浓度控制在0.15%,并在处理完成后,在其中加入10mg氯化钠(NaCl)与0.5mg乙二胺四乙酸(EDTA)。将血样浓度控制在150mM与10mM中。在后续试验中,将血样在室内放置15min,在1×104r/min下进行离心处理,并将离心时间控制在5min。弃上相,并加入50μL去离子水,做好沉淀处理工作。
(2)可以借助乙酸处理方式,在上述稀释液中加入细胞裂解液,并补加10mgNaCl,在沉淀过程中,借助TEPH7.6悬浮液,5000rpm离心5min,弃上相,采取重复洗涤方式,得到去离子的悬浮沉淀物质。
(3)虫体消化方式,在提取虫体DNA后,应用乙醇过滤,借助离心方式,收取虫体DNA。在完成上述步骤后,借助点杂交方式进行试验,并对核酸探针检测结果加以分析,得到精准检验结果,保证食品安全与质量。
5讨论
食品安全问题尤为重要,近些年,食品安全问题频发,严重影响人们的健康与生活。在当前食品检测过程中,常见的是微生物污染问题,应借助核酸探针检测方式,及时发现产品内部存在的问题,从源头上加以管控,最大限度降低质量问题,为更多食品安全检测工作的开展打下坚实基础。
声明:本文所用图片、文字来源《质量安全与检验检测》2020年第5期,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系
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