(八)尿素琼脂

蛋白胨1g，氯化钠5g，葡萄糖1g，磷酸二氢钾2g，0.4％酚红溶液3mL，琼脂20g，蒸馏水1000mL，20％尿素溶液100mL，pH7.2±0.1。

将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min。冷却至50～55⁰C，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2％，最终pH为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。

试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36-1℃培养24h，观察结果。

尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。

(九)缓冲葡萄糖蛋白胨水(V—P试验用)

V-P试剂

磷酸氢二钾5g，多胨7g，葡萄糖5g，蒸馏水1000mL，pH7.0。

溶化后校正pH，分装试管，每管1 mL，121⁰C高压灭菌15min。

V—P试验方法：用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。加入6％a-萘酚-酒精溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液O.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±l℃下培养4h再进行观察。

(十)氰化钾(KCN)培养基

蛋白胨10g，氯化钠5g，磷酸二氢钾0.225g，磷酸氢二钠5.64g，蒸馏水1000mL，O.5％氰化钾溶液20mL，pH7.6。

将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121⁰C高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5％氰化钾溶液2.OmL(最后浓度为l:10000)，分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4⁰C冰箱内，至少可保存2个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。

试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取一环接种于氰化钾(KCN)培养基。并另挑取一环接种于对照培养基。36±1⁰C培养1～2d，观察结果。如有细菌生长即为阳性(不抑制)，经2d细菌不生长为阴性(抑制)。

氰化钾是剧毒药物，使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。

(十一)蛋白胨水(靛基质试验用)

蛋白胨(或胰蛋白胨)20g，氯化钠0g，蒸馏水1000mL，pH7.4。

按上述成分配制，分装小试管，121⁰C高压灭菌15min(蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。购买每批蛋白胨后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。)

(十二)靛基质试剂

柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL。

欧一波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL 95%酒精内。然后缓慢加入浓盐酸20mL。

试验方法：挑取小量培养物接种，在36±1⁰C~培养1～2d，必要时可培养4～5d。加入柯凡克试剂约O.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧一波试剂约O.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者与液面接触处呈玫瑰红色。

(十三)半固体琼脂

蛋白胨lg，牛肉膏0.3g，氯化钠O.5g，琼脂0.35～O.4g，蒸馏水100mL，pH7.4。

按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH。分装小试管。121⁰C葛压灭菌：15min，直立凝固备用。

(十四)Elek氏培养基(毒素测定用)

豚胨20g，麦芽糖3g，乳糖O.7g，氯化钠5g，琼脂15g，40%氢氧化钠溶液1.5mL，蒸馏水1000mL，pH7.8。

用500mL蒸馏水溶解除琼脂以外的成分，煮沸，并用滤纸过滤。

用1mol／L氢氧化钠校正pH。用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂。

将两液混合，分装试管：10mL或20mL。121⁰C高压灭菌：15min。临用时加热溶化琼脂倾注平板。

(十五)氧化酶试剂

1％盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，于冰箱内避光保存。

1％a-萘酚溶液。

取洁净白滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈粉红色，并逐渐加深，再加一滴a-萘酚溶液，阳性者于30s内呈现鲜蓝色。阴性于2min内不变色。

（十六）乳糖胆盐发酵培养基

成分：蛋白胨20g，猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，蒸馏水1000mL，pH7.4。

(十七)三糖铁琼脂(TSI)制备方法培养基。

成分：蛋白胨20g，牛肉膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，氯化钠5g，硫酸亚铁铵[Fe(NH₄)₂(SO₄)]₂0.2g ，硫代硫酸钠0.2g，琼脂12g，酚红0.025g，蒸馏水1000mL，pH7.4。

制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂煮沸溶化，加入0.2％酚红水溶液12.5mL，摇匀，分装试管，121℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。

(十八)赖氨酸脱羧酶试验培养基制备方法培养基。

成分：蛋白胨5g，酵母浸膏3g，葡萄糖1g，蒸馏水1000mL，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，L-氨基酸或DL氨基酸0.5或1g/100mL。

制法：除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按0.5%加入，DL-氨基酸按1％加入，校正pH至6.8，对照培养基不加氨基酸，分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。

试验方法：接种培养物于36±1℃培养18-24h，观察结果，氨基酸脱羧酶阳性者，由于产碱培养基应呈紫色，阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色，对照管应为黄色。

(十九)Honda氏产毒肉汤

水解酪蛋白20g，酵母浸膏粉10g，氯化钠2.5g，磷酸氢二钠15g，葡萄糖5g，微量元素O.5mL，蒸馏水1000mL，pH7.5。

制法：溶解后校正pH，高压灭菌121⁰Cl5min，待冷45-50⁰C时加入林可霉素溶液，每毫升培养基内含90μg。

微量元素配方：

硫酸镁5g，三氯化铁 O.5g，氯化钻2g，蒸馏水100mL。

(二十)致病性大肠埃希氏菌诊断血清、侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清、产肠毒素大肠埃希氏诊断血清、出血性大肠埃希氏菌诊断血清。

(二十一)产肠毒素大肠埃希菌LT和ST酶标诊断试剂盒，上海市卫生防疫站出品。

(二十二)抗LT抗毒素。

(二十三)多粘菌素B纸片：300IU，φ16mm。

(二十四)革兰氏染色液。

参考资料：食品卫生微生物检验标准手册

相关链接：尿素琼脂，磷酸氢二钾，蛋白胨水