烟碱是烟叶中天然生物碱的主要化学成分，分子结构（图1a）是由两个氮杂环构成，吡咯环pKa=7.87，吡啶环pKa=3.15。吡啶环中的氮原子由于芳香化的影响，碱性很弱，与芳胺的碱性相近。吡咯烷环中的氮原子属于叔胺，由于此环没有芳香化，其碱性与脂肪族叔胺碱性相近，所以，烟碱易和酸进行化学反应。已有报道指出，烟碱在烟叶中主要以柠檬酸、苹果酸等有机酸盐的形式存在；烟碱与硅钨酸作用生成烟碱硅钨酸。这些结果说明，合成烟碱的有机酸盐，代替单体烟碱，用于制品配方，研发新型烟草制品的技术路线是可行的。而且结合态的烟碱不仅可以改善口感，而且影响烟碱的溶出行为，能持续提供生理满足感和口感。

最近，据《国际烟草》和烟业通讯网报道，美国帕克斯实验室推出一款新的智能电子烟，该电子烟是以“尼古丁盐”为核心原料，而非传统电子烟中游离态的烟碱。美国杜克大学JedE.Rose教授成功合成了烟碱丙酮酸盐，并进行了相关药代动力学方面的研究。同时，有关烟碱酒石酸盐，水杨酸和烟碱共晶体的相关研究也有报道。烟碱与有机酸成盐，使得烟碱以固态形式存在，相较于易挥发且易被氧化的烟碱单体，固体烟碱盐具有良好的储藏稳定性。

烟碱的不同存在形式（包括烟碱盐），对烟碱的释放以及跨膜渗透速率有不同的影响[7]。有研究表明，质子态的烟碱相较于中性游离态烟碱，由于分配系数以及扩散率更小，在口腔粘膜中的渗透速率小；烟碱的质子化可以减缓烟碱的透膜扩散，改善烟碱在体内的代谢行为。因此，利用固体有机酸固化液态烟碱，形成烟碱的固态盐形式，可以作为新的烟碱引入形式，应用于新型烟草制品的研发。

龙胆酸（gentisicacid），即2,5-二羟基苯甲酸（图1b），是一种多羟基酸，具有解热镇痛的功效[10]，也用作医药中间体，易与碱性物质成盐。本文利用化学合成方法，制备烟碱龙胆酸盐，培养单晶体，解析其其结构。将制备的烟碱龙胆酸盐作为模型分子，利用药物透皮扩散技术，以离体猪口腔颊黏膜为载体，研究了不同酸碱度下烟碱龙胆酸盐的跨膜扩散行为，并和纯烟碱进行了对比，对其烟碱的释放规律进行了探究。本研究可为无烟制品配方设计、改进及应用提供实验和理论参考。

1 实验部分

1.1 试剂及仪器

1.1.1 试剂烟碱标准从由陕西港华生物科技有限公司购置，纯度99%（HPLC纯度）；龙胆酸（纯度99%）由成都市科龙化工试剂厂购置；甲醇（色谱纯）由德国默克密理博试剂公司购置；其他所用试剂均为分析纯。水为高纯水，由MilliporeSynergy超纯水系统制备。

1.1.2 仪器X-射线单晶衍射仪：CCDX-caliburNova型，牛津衍射有限公司；高效液相色谱仪：Agilent1200series（美国安捷伦科技有限公司）；pH计：上海精密科学仪器有限公司；METTLERTOLEDO分析天平：感量0.0001g，德国METTLERTOLEDO公司；13mm×0.45μm水相针式滤器：上海安谱科学仪器有限公司；HY-8调速振荡器：常州国华电器有限公司；KQ-700DE型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。Milli-Q50超纯水仪：美国MILLIPORE公司。

1.2 实验方法

1.2.1 烟碱龙胆酸盐的制备取0.95g龙胆酸于锥形瓶中，加入5mL乙醇使其完全溶解，再加入15mL的超纯水，搅拌至混合均匀。对锥形瓶进行遮光处理后，置于恒温搅拌器中，在充分搅拌下滴加1.01g烟碱，控制反应温度为35℃，30min滴加完毕。控制溶液pH在5.5~6.0之间搅拌至反应结束。过滤反应后所得溶液，将滤液置于常温避光处静置24h后，溶液转移至真空干燥箱。在温度35℃、真空度0.8MPa条件下进行真空干燥，一周后得到棕黄色粘稠液体。黄色粘稠液体在常温避光下进行晶体培养，数周后得到棕黄色透明针状晶体。

1.2.2 单晶结构测定选择尺寸大小合适的棒状晶体，利用CCDXcaliburE型X-射线单晶衍射仪（瑞士Bruker公司）进行X-射线单晶衍射测试。MoKα辐射，λ=0.71073，293K，θ扫描范围3.13-26.37°。Olex2-1.1（SHELX-97）软件包用于结构解析与精修。

1.2.3烟碱定量分析方法准确移取50μL烟碱标准品于5.0mL棕色容量瓶，用超纯水稀释，超声处理约2.0min后准确定量至5.0mL，制备成烟碱浓度为101mg/mL的储备液。配制烟碱系列浓度，检测波长设定为259nm，瑞典KromasilC18色谱柱（250×4.6mmi.d），绘制工作曲线。线性关系为：y=10786.1x-69.9，R2=0.9999。测定烟碱龙胆酸盐中烟碱含量测定时，准确称取所制备的烟碱龙胆酸盐5.08mg，于5.0mL带塞的棕色容量瓶中，滴加适量3次蒸馏水使其溶解。超声约10min后，用3次蒸馏水定容至刻度，摇匀得浓度分别为1.016mg/mL的烟碱龙胆酸盐样品溶液。分析前经0.45µm微孔滤膜过滤后，直接进样测定。

1.2.4 跨膜扩散实验样品制备人工模拟口腔唾液配方见表1，准确称取表1中各物质，溶于1L超纯水中，待溶解完全后即得模拟唾液储备液。分别取一定量模拟唾液储备液，用稀盐酸调节pH，调至pH=6.7和pH=5.5，得到pH分别为6.7和5.5的模拟唾液储备液。准确取烟碱200mg两份以及当量的烟碱龙胆酸盐（452mg）两份，分别用对应pH的模拟唾液储备液溶解，加入一定量稀盐酸使得最终定容后溶液pH为6.7和5.5，并用对应pH的储备液定容于100mL容量瓶，得到pH分别为6.7和5.5的2mg/mL烟碱储备液和烟碱龙胆酸盐储备液。准确取烟碱100mg两份以及当量的烟碱龙胆酸盐（226mg）两份，分别用对应pH的模拟唾液储备液溶解并定容于100mL容量瓶，并加入微量稀盐酸调节其pH至6.7和5.5，得到pH分别为6.7和5.5的1mg/mL烟碱储备液和烟碱龙胆酸盐储备液。