遗传性疾病，属于常染色体隐性遗传疾病，致病基因为GSS和OPLAH。我国既往与本病相关的报道大多基于临床上表现出来的代谢性酸中毒、溶血性贫血、智力损害等症状，但上述症状缺乏特异性，且关于该病基因方面的研究国内报道很少。本研究中，对2014年9月4日送检至第四军医大学DNA分型中心的一例疑似5-羟脯氨酸尿症的患儿进行了有机酸筛查及GSS基因诊断。

尿有机酸筛查结果显示患儿5-羟脯氨酸显著升高，进一步进行基因定位，发现患者GSS基因的5号外显子有一个纯合突变位点c.491G>A，这一碱基突变导致GSS蛋白164位精氨酸发生错义突变，突变为谷氨酰胺。患者这一纯合突变分别遗传自父母的异常等位基因。

1对象和方法

1.1一般资料

患儿男，9天，以“气促、精神差9天”之代诉入院，患儿系1胎1产，胎龄39+3周，顺产，否认宫内窘迫及生后窒息史，生后Apgar评分不详，发育正常。患儿生后即有气促，呼吸频率约65次/分，伴有口周发绀，哭闹及吃奶时明显，伴精神差，表现为少哭少动，睡眠增多，转诊于“唐都医院”，多次查血气分析示代谢性酸中毒，查尿有机酸代谢分析示5-羟脯氨酸升高，血液代谢分析示谷氨酸明显。根据患儿病史，结合血气分析，血氨基酸，酰基肉碱及尿有机酸分析，临床诊断5-羟脯氨酸尿症，后予以碳酸氢钠纠酸等治疗患儿仍酸中毒明显。

1.2有机酸筛查肌酐测定

取相当2.5μmol肌酐的原尿或滤纸洗脱尿样；加入50μg内标十五烷酸、50μg内标2-酮己酸、100μl0.25mol/L盐酸羟胺、200μl0.25mol/L硫酸和500μl0.5%饱和氯化胺混合45min以上，完成α-酮酸的肟化反应；有机相萃取：分别用3ml乙酸乙酯和乙醚两次萃取，合并有机溶剂相，并用无水硫酸钠去除残余水分，加入外标C24；浓缩：用纯净氮气吹干；衍生：加入100μl甲基硅烷化衍生剂，置干燥加热器上60℃衍化60min，冷却后用正己烷稀释至500μl；取1μl上样进行GC-MS分析。上机方法：（安捷伦气相色谱质谱仪：7890/5973N；色谱条件：配备7673型自动进样器；HP-5毛细管色谱柱（柱长30m，直径0.32mm，膜厚0.25μm）；模式：分流式进样，分流比50:1；进样口温度250℃；氦气为载气（1ml/min）；界面温度250℃；色谱柱箱程序升温从60℃开始，20℃/min升温至90℃后停留4min，然后以8℃/min升温至300℃，样本分析时间为30min；质谱条件：扫描模式：总离子扫描方式，质荷比（m/z）范围50-600，扫描周期0.4s。

1.3基因分析

标本采集：抽取患者及其父母外周血，使用RelaxGeneBloodDNASystem（DP319，天根，北京）提取全血基因组DNA，依据5-羟脯氨酸尿症致病基因谷胱甘肽合成酶（glutathionesynthetase，GSS）的基因序列，设计引物（引物序列见表1），利用聚合酶链式反应（PCR）扩增（GeneAmpPCRSystem9700扩增仪）该基因编码区的全部外显子。PCR反应条件：94℃预变性10min，变性94℃30s，退火60℃30s，延伸72℃40s，扩增35个循环；最后72℃延伸10min。GSS基因序列分析：PCR产物送至奥美德诺公司直接测序后对照正常GSS基因序列分析测序结果，寻找突变位点。

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