凝集素是一种非酶、非抗体可以特异性结合单糖或者多糖的蛋白质，具有分子识别功能，同时也具有抗病毒和抗菌的作用，它可与HIV病毒竞争T淋巴细胞上的糖蛋白受体，或抑制HIV逆转录以及抑制HIV病毒整合至人类基因组中来抑制HIV病毒增殖(牛耀辉等，2006)。研究显示，凝集素在植物体内抗病原微生物中也发挥着重要作用，不仅能够通过细胞壁或胞外聚糖的间接机制来防御植物病毒，而且还具有杀真菌和昆虫的功能。依据来源可将凝集素分为3类，即动物凝集素、植物凝集素和微生物凝集素，其中，动物凝集素又可分为C型凝集素、I型凝集素、P型凝集素、五聚体蛋白和s型凝集素即半乳糖凝集素5个主要家族。半乳糖凝集素(galectin)在凝集素家族中分布广泛，最早在哺乳动物中发现，因能特异性地结合半乳糖苷而得名。

迄今为止，在哺乳类动物中已发现15种不同的半乳糖凝集素，均含有糖识别结构域(carbohydraterecognitiondomain，CRD)，可特异性识别糖链末端的半乳糖苷，属于非膜整合性的可溶蛋白(Vasta，2009)。研究表明，在无脊椎动物发生病原体感染时，Galectin作为模式识别受体(patternrecognitionreceptors，PRR)，可通过CRD特异性地结合半乳糖苷，引起免疫反应。例如，家蚕BmGalectin-4对革兰氏阴性菌、阳性菌和真菌的结合(王鹏等，2014)；白蛉Galectin具有特异性识别利什曼原虫表面的磷酸酯多糖的功能(Kamhawieta1．，2004)；菲律宾蛤仔Galectin可结合派琴虫Perkinsusolseni和弧菌Vibrio表面的半乳糖和N一乙酰半乳糖胺而进行病原菌的识别(Kimeta1．，2008)；海鳗的原型Galectin参与细胞对寄生虫的包囊作用(Nakamuraeta1．，2012)；大西洋鳕鱼Galectin．1能凝集革兰氏阳性和阴性菌，参与其免疫防御过程(Rajaneta1．，2013)；中华绒螯蟹Eriocheirsinensis的Galectin对多种病原菌具有较强的凝集活性，而且这种凝集可被D．半乳糖和仅．乳糖抑制(Wangeta1．，2016)。然而目前有关蜜蜂的Galectin功能还未见报道。蜜蜂属于膜翅目(Hymenoptera)蜜蜂科(Apidae)昆虫的统称，其中蜜蜂属Ap／s的东方蜜蜂Apiscerana，西方蜜蜂4墒mellifera和黑小蜜蜂Apisandreniformis等9个蜂种对于人类生产生活有着十分重要意义，作为经济动物，不仅为人类提供丰富蜂产品，而且作为重要的授粉昆虫，能够为虫媒植物进行授粉，对提高农作物的产量和质量起到不可替代的作用。

据统计，世界上约三分之一的农作物依靠蜜蜂授粉，全球昆虫授粉的经济价值估计为每年2120亿美元，相当于世界农业生产总值的9．5％(Tantilloeta1．，2015)。然而近年来，由于蜂病毒病的广泛流行，不仅严重威胁着养蜂业的发展，而且也给农业生产造成了不可估量的损失。蜜蜂在抗病毒侵袭过程中，不具备高等动物完善的免疫体系，缺乏特异的抗原抗体反应，但在长期进化过程中，形成了独特的先天免疫系统和免疫机制，从而可以保护自身免受外源物侵害。是否在蜜蜂机体中也存在着半乳糖凝集素蛋白，能够与蜂病毒存在相互作用，目前还尚不清楚。鉴于此，本研究根据西方蜜蜂数据库基因组信息，成功克隆到一个中华蜜蜂ap／sceranacerana半乳糖凝集素基因，在对其序列进行生物学信息分析之后，进行了人工密码子优化、表达，获得重组蛋白，并对该蛋白与蜜蜂常见病毒是否存在相互作用进行了研究。

1材料与方法

1．1供试病料

疑似感染中蜂囊状幼虫病毒(Chinesesacbroodvirus，CSBV)在封盖期未能正常封盖的中华蜜蜂工蜂幼虫于2016年4月份收集于辽宁省本溪市某养蜂场，位于辽宁省东南部(123．730E，41．30N)；疑似感染慢性蜜蜂麻痹病毒(Chronicbeeparalysisvirus，CBPV)的意大利蜜蜂Apis．搬lliferaligustica工蜂成蜂于2017年7月份收集于辽宁省辽中县某养蜂场，位于辽宁省中部(122．70E，42。N)；疑似感染残翅病毒(deformedwingvirus，DWV)的意大利蜜蜂工蜂成蜂于2017年6月份收集于辽宁省锦州市某蜂场，位于辽宁省西部(121．15。E，41．13。N)；健康中华蜜蜂2—3日龄工蜂幼虫和健康意大利蜜蜂工蜂成蜂收集于锦州医科大学实验动物养殖基地。上述蜜蜂的饲养场地环境良好，蜜源充足，满足蜜蜂生活需求。上述发病样本分别用生理盐水除去表面杂质，放入离心管中，经RT．PCR检测确诊后，置于一80℃保存备用。

1．2主要试剂和仪器

总RNA提取试剂盒、DNase购自美国Promega公司；GST标签抗体购自生工生物工程(上海)股份有限公司；大肠杆菌Esche—chiacoliBL21(DE3)感受态细胞、FlyCutBamHI、FlyCutXhoI和低分子量蛋白Marker购自北京全式金生物技术有限公司；质粒抽提试剂盒、胶回收试剂盒购自Axygen公司；TaqDNAPolymerase试剂盒购自Invitrogen公司；GST重组蛋白纯化试剂盒购自生T生物T程(上海)股份有限公司；RNAPCRKit(AMV)Ver3．0试剂盒、限制性内切酶、ExTaq。MDNA聚合酶、3"4DNA连接酶等购自大连TaKaRa公司；载体pGEX6P一1由本实验室保存。

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