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SE-HPLC测定刺糖多糖相对分子质量及纯度

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大C 0 1106 2022-01-02
【摘要】目的建立高效液相凝胶色谱法(SE—HPLC)测定刺糖多糖相对分子质量和纯度的方法:分析刺糖多糖的相对分子质量分布及并进行含量测定。方法采用水提醇沉法及AB一8大孔吸附树脂和DEAESepharoseCL一6B阴离子交换树脂分离纯化不同相对分子质量的多糖组分,用TSK—GELG4000PWXL,7.8mmX300mm色谱柱,2414示差折光检测器,测定其相对分子质量分布和纯度。结果得到刺糖多糖组分AP2—4,其多糖相对分子质量为4.9×10,纯度含量为(93±3)%;相对分子质量分布:重均分子量(M)为4.9733;数均分子量(M)为4.9518;峰值分子量()为6.3112,4.8732;多分散度(D)为1.0043。结论建立了简便、快捷、精密度高的凝胶色谱柱方法,可较准确地测定刺糖多糖的纯度和相对分子质量分布。
  • 刺糖(Alhagi-honey)为骆驼刺(AlhagisparsifoliaShap.)的分泌物,是由枝叶分泌出糖类凝结而成,经过干燥敲打而脱落,是新疆少数民族常用药。多糖是自然界中含量最丰富的物质之一,由二十多个到上万个单糖构成的高分子化合物,普遍存在于动植物和微生物体内,并且具有复杂的、多方面的生物活性和功能,其在临床上有广泛的使用价值,多糖具有抗肿瘤、抗衰老、降血糖、免疫调节等活性。

    有研究者从刺糖中分得刺糖多糖API一1,API一2,AP1—3,AP2—1,AP2—2,AP2—3组分,得到相应的相对分子质量。除此之外,还有一些小分子糖和低聚糖,如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等。为了更好地了解刺糖多糖的相对分子质量分布及其含量,本实验采用高效液相凝胶色谱法(SE—HPLC)对刺糖中的多糖组分的含量和相对分子质量分布及纯度进行研究,为进一步研究刺糖多糖奠定了理论基础。

    1仪器与试药

    1.1仪器

    WatersHPLC高效液相色谱仪(e2695)、2414示差折光检测器(美国Waters公司);TB一114电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);BT一100SD恒流泵(上海青浦沪西仪器厂);CBS—A程控全自动部分收集器(上海青浦沪西仪器厂);N一1001旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);DK一$22电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司);SHB一3循环水式真空泵(郑州长城科教仪器有限公司);UV一2550紫外一可见分光光度计(日本岛津公司)。

    1.2试药

    刺糖(购买于新疆维吾尔民族医院,批号:20140801)经新疆医科大学天然药物化学教研室帕丽达教授鉴定为维吾尔药材刺糖(Alhagi—honey);AB一8大孔吸附树脂(天津市光复精细化工研究所,批号:20170708);DEAE—SepharoseCL一6B纤维素树脂(北京英莱克科技发展有限公司,批号:A221776);DextranStandard5000,12000,50000,150000,410000系列葡聚糖标准品(美国Sigma公司,批号:BCBP1233V);无水葡萄糖(天津市天新精细化工开发中心,批号:20050530);截留分子量3500透析袋(经科宏达公司);石油醚、95%乙醇无水乙醇丙酮氢氧化钠氯化钠葸酮浓硫酸浓盐酸均为分析纯。

     


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