北方伟业计量集团有限公司
红参,五加科植物,其性温、味甘、香味较浓。红参相比于人参组织更加致密,更利于保存。红参,是一种既可食用,又可药用的植物,具有广泛的应用和开发前景。红参中主要活性成分为皂苷和多糖。长期以来,对红参的研究一般都集中在人参皂苷上,忽略了红参多糖活性成分的功效。关于红参多糖的研究集中在提取条件的优化以及生物活性方面,研究表明,红参多糖具有抗肿瘤、抗氧化、提高免疫力、调节血脂和血糖、抗炎等作用。目前,对于红参多糖的体内抗氧化能力研究较少。人与外界持续接触,包括呼吸,外界污染,放射线照射等因素,在人体内产生自由基。研究表明,癌症、衰老等其他疾病与过量的自由基的产生有关联。抗氧化系统是可与免疫系统比拟的,具有完善和复杂功能的系统,抗氧化能力越强,人体越健康。此次实验以红参多糖(redginsengpolysaccharidesRGPs)为研究对象,通过比较正常对照组小鼠与RGPs低、中、高剂量组小鼠脏器系数,血清和肝、肾、脾组织中MDA含量、SOD和GSH-Px活力,研究RGPs对小鼠的体内抗氧化活性,为RGPs今后的进一步开发利用提供依据。
一、材料与方法
1、材料与试剂
红参:购自吉林省长白县。
RGPs制备方法:红参粉末,加入适量蒸馏水,超声提取。离心(4000r/min,10min),取上清,sevag法脱蛋白,然后浓缩,透析溶液,80%乙醇醇沉静置,过滤离心后干燥得红参多糖。采用苯酚-硫酸法,测得RGPs的多糖含量为67.83%。
普通昆明小鼠(体重量20~35g),购于黑龙江中医药大学;无水乙醇、正丁醇、三氯甲烷、冰醋酸等(分析纯),蛋白定量、丙二醛、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒,南京建成生物工程研究所。
2、仪器与设备
电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司型号:E-10D),恒温水浴锅(上海申胜生物技术有限公司型号:W202B),紫外分光光度计(美国Varian公司型号:Cary100),小型高速冷冻离心机(Saitexingyi离心机仪器有限公司型号:TGL-16M),小型高速常温离心机(上海安亭科学仪器厂型号:TDL-80-2C),酶标仪(美国伯乐),旋涡混匀器(上海梅香仪器有限公司型号:ZW-A),组织匀浆机(宁波新芝科器研究所型号:DY89-I),电热恒温鼓风干燥箱(昆山一恒仪器有限公司型号:DHP-9012)。
3、方法
(1)动物分组及剂量
小鼠适应喂养后随机分为4组:正常对照组(0.9%生理盐水,0.2mL/d)、RGPs低剂量组(100mg/kg,0.2mL/d)、RGPs中剂量组(200mg/kg,0.2mL/d)、RGPs高剂量组(400mg/kg,0.2mL/d)。每组8只,连续灌胃30d,自由摄食饮水。
(2)指标测定
小鼠禁食24h,取眼球血,离心(4℃,3000r/min,离心10min),取上清液,待测。处死小鼠,解剖取肝、肾、脾用冷生理盐水漂洗,滤纸擦拭干净,称重。计算脏器指数。肝、肾、脾分别用生理盐制备成10%匀浆,保存于-20℃待测。按照试剂盒说明测定血清和肝、肾、脾组织中MDA含量、SOD和GSH-Px活力。
脏器指数(mg/g)=器官质量/小鼠体质量
(3)数据处理
实验数据采用SPSS软件处理,用平均值±标准差表示结果,P<0.05为显著差异。
二、结果与分析
1、RGPs对小鼠肝、肾、脾指数的影响
实验可以通过脏器指数一定程度上反映灌胃RGPs后对小鼠器官的影响,进而初步分析RGPs的毒副安全性。由表1可知,连续灌胃30天后,与正常对照组相比,RGPs对小鼠肝指数、肾指数和脾指数均没有显著性差异(P>0.05),说明灌胃RGPs不影响小鼠的肝脏、肾和脾。
3、RGPs对小鼠血清及各组织MDA含量的影响
MDA是膜脂过氧化过程中最重要的产物之一,可通过测定MDA的含量,了解膜脂过氧化和膜系统受损程度。从表2可以看出,与正常对照组相比,RGPs3个剂量组均可降低血清和各组织中MDA的含量,其中RGPs高剂量组对血清和肝、肾、脾中MDA的含量分别降低了12.8%、40.23%、45.63%和39.34%。红参多糖3个剂量组连续灌胃小鼠30天后,RGPs低剂量组可降低血清和肝组织MDA含量,但无显著差异,对其他组织中MDA含量的降低具有差异显著性。RGPs中、高剂量组均能显著降低血清和各组织中MDA的含量。RGPs不同剂量组对降低肾组织中的MDA含量无显著差异。这可能是RGPs具有稳定细胞膜结构,抑制了脂质进行过氧化反应。表明RGPs能够稳定细胞膜结构,抑制小鼠体内的脂质过氧化过程,从而减轻自由基对机体损伤的程度。
2、RGPs对小鼠血清及各组织SOD活力的影响
SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子,它可以把有害的超氧自由基转为过氧化氢,然后过氧化氢酶和过氧化物酶将其完全分解为无害的水,因此SOD在细胞免受氧化损伤的过程中起了重要作用。从表3可以看出,RGPs3个剂量组均可提高血清和各组织中SOD的活性,并呈现剂量关系,其中RGPs高剂量组对血清和肝、肾、脾中SOD的活性分别提高了14.86%、20.6%、30.71%和36.08%。连续灌胃小鼠30天后,与正常对照组相比,RGPs低剂量组使血清中SOD的活性提高,无显著差异,对组织中SOD活性提高具有差异显著性。RGPs中、高剂量组均能显著提高血清和各组织中SOD的活性。RGPs中、低两个剂量组对提高肝组织中的SOD活性无显著差异。
4、RGPs对小鼠血清及各组织GSH-Px活力的影响
GSH-Px是生物体内广泛存在的抗氧化酶之一,能够阻断活性氧自由基对机体的进一步损伤,使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物,是生物体内重要的活性氧自由基清除剂。从表4可以看出,RGPs3个剂量组均可提高血清和各组织中GSH-Px的活性,并呈现剂量关系,其RGPs高剂量组对血清和肝、肾、脾中GSH-Px的活性分别提高了39.18%、38.25%、24.37%和59.22%。小鼠灌胃30天后,与正常对照组相比,RGPs低剂量组显著提高血清和肝、肾组织中GSH-Px的活性,对脾组织中GSH-Px的活性提高无显著差异。RGPs中、高剂量组均能显著提高血清和各组织中GSH-Px的活性。RGPs中、低两个剂量组对血清中的GSH-Px的活性提高无显著差异。
三、结论
通过RGPs对小鼠体内抗氧化活性的硏究可知,RGPs能显著降低血清和肝、肾、脾组织中MDA的含量,并提高SOD和GSH-Px的活力,且呈现明显的剂量关系。表明RGPs具有较好的清除体内过多自由基的作用,从而防止自由基氧化对机体导致的损伤,进而起到抗氧化作用。因此,RGPs具有一定的体内抗氧化能力,为RGPs今后的开发利用提供科学依据。
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