2.9油茶叶提取物的化学成分分析

由上述结果可知油茶叶提取物中的多酚与黄酮可能是抑制5α-R的重要物质基础，采用UPLC-TripleTOF-MS/MS对COLE中的酚类化合物进行定性分析，结果在COLE中中共发现22种酚类化合物。图8为负离子模式下的总离子图，表4为COLE中酚类化合物鉴定结果。RichardA.等研究证明芦丁（IC50>100μmol/L）、槲皮素（IC50=23μmol/L）具有I型5α-R抑制活性。另外还发现儿茶素等茶多酚类物质，在无细胞状态下显示出有效的5α-R抑制作用，但在5α-R的全细胞分析中抑制作用不明显。周琛媛等在具有高5α-R抑制活性的油茶蒲聚酰胺组Fr8中分离纯化（采用固相萃取的方式），通过质谱和核磁共振的手段进行结构鉴定出F1为3-O-没食子酰基-4,6,--α/β-D-吡喃葡萄糖（GeminD），F4为3,4,6-3-O-没食子酰基-α/β-D-吡喃葡萄糖（GAG）。这些物质均在COLE中被发现，它们是COLE发挥5α-R抑制活性的物质基础。

3结论

本研究以5α-R为研究靶点建立酶促反应体系，通过确定粗酶提取物、NADPH、T的适宜添加浓度优化该体系，确定反应体系如下：PBS缓冲液（pH7.4）300μL，0.76mg/mL的粗酶提取物500μL，2mmol/L的T50μL，样品50μL，2mmol/L的NADPH100μL，37℃下反应30min。按照该体系用HPLC法测量临床上使用的I型5α-R抑制剂度他雄胺的5α-R抑制活性，结果测得其IC50为6.24nmol/L证实该法可靠有效。通过重复性试验证实该反应体系具有稳定性。然后用该法进一步测定、比较不同油茶叶提取物5α-R抑制活性，其中50%乙醇油茶叶提取物的5α-R抑制活性最高（IC50=259.56μg/mL），证明50%乙醇油茶叶提取物是潜在的植物来源的5α-R抑制剂。最后采用UPLC-TripleTOF-MS/MS对油茶叶提取物中的化学成分进行了分析鉴定，结果共发现22种酚类化合物，其中槲皮素、芦丁、儿茶素、3-O-没食子酰基-4,6,--α/β-D-吡喃葡萄糖（GeminD），3,4,6-3-O-没食子酰基-α/β-D-吡喃葡萄糖可能是COLE发挥5α-R抑制活性的物质基础。因此本研究证明了油茶叶提取物是天然的5α-R抑制剂，在治疗雄性激素依赖型疾病方面具有良好的应用前景。

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