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关于液相色谱柱的内径和流速的关系你了解吗

沈磊-会员头像-m.cellulartx.com伟业计量
沈磊 2020-11-23 21:37 评论( 0 ) 浏览( 8326 )

液相色谱柱,在我个人看来,是液相色谱最核心的耗材之一,她给我们带来高柱效的峰型同时,她也是非常脆弱的。剧烈撞击、高温、高流速、缓冲盐、过高过低的PH 等等,都会给色谱柱带来不可逆的损伤。

没到国抽,由于样品量很大,大家都想缩短液相色谱柱的分离时间,有些老师喜欢提升流动相的流速,我们的分离时间会减少,但是不可避免的损失了很多柱效,如果样品基质复杂,更会影响分离度。所以我个人不建议做多混时提高。

言归正卷,我们液相色谱柱的尺寸一般包括长度、内径、粒径。比如250cm*4.6mm,5μm,100cm*2.1mm,2.7μm等。为啥色谱柱的内径都是一些很零碎的数字,好问的老师可能有这个疑问,为什么我们的内径都是4.6mm,2.1mm,咋不是个赏心悦目的整数呢?

这就涉及到范德姆特方程,也就是大家常说的范德姆特大对勾。

首先要理解流速和柱效,对于给定的一根色谱柱(长度,填料粒径固定)越大的流速能产生越高的分析速度,越小的板高能产生越大的柱效;所以,在老范的对钩当中,横坐标数值越大,分析速度越快;纵坐标数值越小,柱子的分离效果越好。

知道了这些,我们就大概能理解老范画的这个对钩代表的意思了:对应一根固定的色谱柱:柱效随着流速提升而升高,到达一个最大值以后,又开始随流速增大而降低,这个让色谱柱达到最大柱效的流速值,被叫做最佳流速,在最佳流速附近保证实际柱效与最佳柱效差异很小的一个区域内的流速,被叫做最佳流速范围。所以老范的对钩的深层意义就是:谁在最佳流速使用色谱柱,我就给谁画个大对钩。

1mL/min对应的是4.6mm内径色谱柱的最佳流速。当然现在性能好的色谱柱,其最佳流速的范围也比较宽。一般2mm左右的柱子在0.2-0.4mL/min,3mm左右的柱子在0.5-0.8mL/min, 5mm左右的柱子1-2mL/min。

知道这个,下次我们在调节流动相流速的时候就不会迷茫啦

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