邀好友领红包

北方伟业计量集团有限公司

  • 
/标准样品生产认可证书
  • CNAS实验室认可证书
  • 
定级证书
  • 豫南检测资质认定证书
  • 质量管理体系认证证书
  • 伟业计量高企认证证书
  • 中国计量测试学会合作单位

动物细胞基因组DNA提取

xiong-会员头像-m.cellulartx.com
xiong 0 1175 2018-11-04
【摘要】提取DNA的过程是指将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
  • 动物细胞基因组DNA提取

    实验原理

           真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,制备DNA将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,同时保持DNA分子的完整。提取DNA的过程是指将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA(乙二胺四乙酸二钠)存在下保持很高的活性。

          在提取DNA的反应体系中,SDS用于细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离,EDTA则抑制细胞中Dnase活性;而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸,使起与DNA分子分离开来。

    实验材料

    (1)细胞裂解缓冲液:   Tris (pH8.0) 100 mmol/L ;EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L; NaCL 20 mmol/L; SDS 10% ;胰RNA酶 20ug/ml。

    (2)蛋白酶K: 称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中,用一次性过滤器过滤除菌,-20℃备用。

    (3)TE缓冲液(pH 8.0),高压灭菌后室温贮存。

    (4)酚:氯仿:异戊醇=25:24:1(体积比)。

    (5)NaAc 3 mol/L。

    (6)异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。

下载文档到电脑,使用更方便

1 积分

下载论文
请告知您的电话号码,我们将立即回电

通话对您免费,请放心接听

温馨提示:

1.手机直接输入,座机前请加区号 如13803766220,010-58103678

2.我们将根据您提供的电话号码,立即回电,请注意接听

3.因为您是被叫方,通话对您免费,请放心接听

请设置您的密码:
分享到微信
Baidu
map