利用荧光液相色谱法和羟基乙酸铅作为净化剂测定啤酒中的赭曲毒素A

1引言

赭曲毒索A广泛存在于赭曲毒素中,是一种分布很广的真茵毒索,很多曲霉属的微生物如赭曲霉、黑曲霉和碳黑曲霉等都能产生。在谷物、霉变葡萄和葡萄酒啤酒以及摄人污染食物后的人血清中,都检测到赭曲毒素A的存在。已经证实这种毒素对动物的肾脏、肝脏和免疫都有危害,同时在兔子和老鼠体内有致癌性。2002年4月19日,联合国粮农组织和世界卫生组织关于食品添加剂的专家联合委员会认为:赭曲毒素A是一种人的肾毒索,有致癌作用。

1998年，欧洲关于食品的科学委员会认为人体.每天赭曲毒素A的最多摄人量为5ng/kgo在啤酒和葡萄酒中,各国都制定了赭曲毒素A的最大允许含量,比如荷兰(0.3ng/mL)、芬兰(0.5ng/mL)、意大利(0.2ng/mL)。分析赭曲毒素A应用最广泛的方法是荧光液相色谱法。另外也使用过光电二极管列阵和质谱检测器。其它的分析技术还有薄层层析、气相色谱-质谱联用法、利用激光装置产生荧光的毛细管电泳和酶学免疫分析。已经报道了啤酒中赭曲毒素A的多种提取和清除方案。比如在除气样品中添加NaHCO3和NaCl,再用免疫亲和柱清除。Jorgensen直接用免疫亲和柱清除除气样品,联合利用聚乙二醇8000-NaHCO3溶解、免疫亲和柱清除、荧光液相色谱检测啤酒和葡萄酒的方法,已经被官方农业化学家协会定为首选方法。

啤酒和其它饮料中赭曲毒素A的测定中，比较了液液萃取和固相萃取等许多样品处理方法。关于液相色谱的分离,大多数作者用反相柱。有报道采用的流动相是乙腈:水:乙酸(99:99:2,v/v/v),乙腈:水:乙酸(50:49:1,v/v1v),0.2mol/L乙腈:pH8.5的磷酸缓冲液:十六烷基三乙基溴化铵(60:3:37,v/v/v)，48%乙腈-52%4mmol/L乙酸钠:乙酸(19:1,v/v),或者甲醇-9%的乙酸水溶液混合成梯度模式。柱后在酸性流动相中添加氨表明可以增加荧光区域,或者增加灵敏度。结果精确且重现性好的最关键步骤是排除基质干扰,提取得当。这项研究的首要目标是找到一种敏感、精确、重现性好且经济的啤酒中赭曲毒素A的分析方法。目前在西班牙市场上检测国产和进口啤酒中的赭曲毒索A时,第一次证明利用羟基乙酸铅作为沉淀剂清除染料和其他成分的做法非常有效。

2材料与方法

2.1样品

在西班牙不同的零售市场上购买88种啤酒样品,其中31种国产，剩余57种分别产自德国丹麦、荷兰、比利时、苏格兰、美国、墨西哥和澳大利亚。有一个样品没有表明产地,只是标签上有“欧洲制造”的字样。在分析前,样品储存在原来的瓶中或者储藏于4~59C冰箱。在分析前一天开瓶,仍然存放在冰箱中。

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