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关于乙酸铅对脑脉络丛Z310细胞毒性作用

大C 0 1408 2022-01-21

【摘要】目的初步探讨乙酸铅诱导大鼠脑脉络丛7310细胞的低剂量兴奋作用和高剂量抑制作用。方法以浓度为0、0．0002、0．002、0．02、0．2、2、20、200、500txmol／L的乙酸铅分别染毒Z310细胞12和24h，用噻唑蓝(MTT)法和2．(2一甲氧基4．硝苯基)一3一(4-硝苯基)一5．(2，4-二磺基苯)一2H一四唑单钠盐(WST_8)法检测细胞生存情况，并观察各剂量组细胞形态变化。结果0．02ixmol／L乙酸铅染毒24h，MTT法检测Z310细胞存活率为107．06％，0．2~mol／L染毒组24h时细胞存活率升高为110．91％；>2~mol／L乙酸铅染毒时，细胞存活率随剂量增加而降低；染毒24h时，200、500~moVL乙酸铅组细胞存活率(MTT法)分别下降至79．37％和76．8l％(P<0．01)；染毒12、24h时，200、500i~moVL乙酸铅组细胞存活率(WST一8法)分别下降至81．67％和72．36％及56．89％和44．05％(P<0．05)。结论低剂量乙酸铅可引起Z31O细胞兴奋效应；高剂量乙酸铅引起z3l0细胞抑制效应；WST一8法检测细胞存活率较MTT法更敏感。

铅不是人体和动物机体生长所必需的元素，而是一种对人体和动物有积累性危害的重金属污染物质，可导致生物体多个系统疾患。神经系统是铅毒性作用的主要靶系统，主要毒性表现在对血脑屏障的损害，而脉络丛上皮细胞是血一脑脊液屏障的物质基础。低剂量兴奋效应是指任何作用因子当以低剂量作用于生物体时会产生兴奋效应，而在较高剂量时产生抑制效应。低剂量兴奋效应的现象已在大量研究中得以证实，但对铅是否存在此效应的报导较少。

z310细胞系是大鼠的脑脉络丛永生化上皮细胞，是近年来体外研究中较成熟应用的具有脉络丛上皮典型屏障与分泌功能的细胞。本研究以z310细胞系为研究对象，用噻唑蓝[3一(4，5-dimetlyltiazol一2一y1)一2，5-diphenyltetrazoli—umbromide，MTT]法和2一(2一甲氧基4．硝苯基)一3．(4一硝苯基)一5一(2，4一二磺基苯)一2H一四唑单钠盐法[2一(2-methoxy-4一nitropheny1)一3一(4一nitropheny1)一5(2，4一disulfopheny1)一2H—tetrazolium，monosodiumsalt，wST一8]，初步探讨乙酸铅诱导细胞的低剂量兴奋作用和高剂量抑制作用。

1材料与方法

1．1主要试剂与仪器

将乙酸铅((CHCOO)，Pb·HO，分子量379．33，美国Sigma公司)用去离子水配成50mmol／L的乙酸铅储备液，以0．2岬的滤器过滤除菌，实验时用培养液调至需要浓度。普通液体培养基(Dulbecco’smodifiedeagle’smedium，DMEM，美国GIBICO公司)；MTT(美国Sigma公司)；二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)、wST一8(日本同仁化学研究所)；Spectramaxplus384酶联免疫光谱分析系统(美国MolecularDevices公司)。

1．2细胞

大鼠脉络丛细胞系z310细胞(美国PurdueUniversity，WeiZheng教授惠赠)。Z310细胞在加入10％胎牛血清(美国GIBICO公司)、100U／mL青霉素、100ixg／mL链霉素、40g／mL庆大霉素和10ng／mL上皮生长因子的达尔伯克改良伊格尔(dulbecco’Smodifiedeagle’Smedium，DMEM)培养基中，37℃、5％CO的环境下培养，每隔2～3d传代1次。待细胞呈对数生长时开始实验。

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