目录

一、耐热大肠菌群

二、大肠埃希氏菌

1、耐热大肠菌群

（1）耐热大肠菌群 （多管发酵法）

一、耐热大肠菌群的含义

耐热大肠菌群 用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。是一群产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

二、培养基与试剂

1.EC培养基 成分： A  胰蛋白胨  20 g B  乳糖  5 g C  3号胆盐或混合胆盐  1.5 g D  磷酸氢二钾  4 g E  磷酸二氢钾  1.5 g F  氯化钠  5 g G  蒸馏水  1000 mL

制法: 将上述成分溶解于蒸馏水中，分装到带有倒管的试管中，68.95 kPa (115℃，10 lb)高压灭菌20 min.最终pH为6.9±0.2。

三、仪器

1.高压蒸汽灭菌器。 2.干热灭菌箱。 3.培养箱36℃±1℃。 4.电炉。 5.天平。 6.冰箱。 7.放大镜或菌落计数器。 8.pH计或精密pH试纸。 9.灭菌试管。 10.恒温水浴:44.5℃±0.5℃或隔水式恒温培养箱

四、检验步骤

1.接种培养

1.1 来自总大肠阳性管

自总大肠菌群乳糖发酵试验中的阳性管(产酸产气)中取1滴转种于EC培养基中，置44.5℃水浴箱或隔水式恒温培养箱内(水浴箱的水面应高于试管中培养基液面)，培养24 h±2 h。 如所有管均不产气，则可报告为阴性，如有产气者，则转种于伊红美蓝琼脂平板上，置44.5℃培养18 h～24 h，凡平板上有典型菌落者，则证实为耐热大肠菌群阳性。

1.2 直接接种

如检测未经氯化消毒的水，且只想检测耐热大肠菌群时，或调查水源水的耐热大肠菌群污染时，可用直接多管耐热大肠菌群方法，即在第一步乳糖发酵试验时按总大肠菌群多管发酵法接种乳糖蛋白胨，即： 取10 mL水样接种到10 mL.双料乳糖蛋白胨培养液中； 取1 mL.水样接种到10 mL单料乳糖蛋白胨培养液中； 另取1 mL水样注入到9 mL灭菌生理盐水中，混匀后吸取1 mL(即 0.1 mL水样〉注人到10 mL.单料乳糖蛋白胨培养液中，每稀释度接种5管。

对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接接种5份10 mL水样双料培养基，每份接种10 mL水样。 培养液在44.5℃±0.5℃水浴中培养24 h±2 h。 如所有管均不产气，则可报告为阴性， 如有产气者，则转种于伊红美蓝琼脂平板上，置44.5℃培养18 h～24 h，凡平板上有典型菌落者，则证实为耐热大肠菌群阳性。

2.结果报告

根据证实为耐热大肠菌群的用性管数，查可能数(MPN)检索表，报告每100 mL水样中耐热大肠菌群的最可能数(MPN)值。

（2）耐热大肠菌群 （滤膜法）

一、耐热大肠菌群滤膜法的含义

耐热大肠菌群滤膜法 耐热大肠菌群滤膜法是指用孔径为0.45 μm 的滤膜过滤水样，细菌被阻留在滤膜上，将滤膜贴在添加乳糖的选择性培养基上，44.5℃培养24 h能形成特征性菌落以此来检测水中耐热大肠菌群的方法。

二、培养基与试剂

1.MFC培养基 成分： A  胰胨  10 g B  多胨  5g C  酵母浸膏  3 g D  氯化钠  5 g E  乳糖  12.5 g F  3号胆盐或混合胆盐  1.5 g G  琼膛  15 g H  苯胺蓝  0.2 g L  蒸馏水  1000 mL.

制法: 在1000 mL蒸馏水中先加入玫红酸(10 g/L)的 0.2 mol/L 氢氧化钠溶液10 mL，混匀后，取500 mL加入琼脂煮沸溶解，于另外500 mL蒸馏水中，加入除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀调pH为7.4，加入苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板，不可高压灭菌。

三、仪器

1.天平。 2.冰箱:0℃~4℃。 3.滤器。 4.滤膜，孔径0.45 μm. 5.培养箱:36℃±1℃。 6.显微镜。 7.隔水式恒温培养箱或恒温水浴。 8.高压蒸汽灭菌器。 9.试管。 10.分度吸管: l mL，10 mL。 11.锥形瓶。 12.小倒管。 13.无齿镊子。 14.平皿:直径为9 cm。

四、检验步骤

1.接种培养

1.1 接种 培养:水样滤完后，再抽气约5 s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在MFC培养基上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡。 然后将平皿倒置，放入44.5℃隔水式培养箱内培养24h±2 h。如使用恒温水浴，则需用塑料平皿，将皿盖紧，或用防水胶带贴封每个平皿，将培养皿成叠封人塑料袋内，授到44.5℃恒温水浴里，培养24 h±2 h。 耐热大肠菌群在此培养基上菌落为蓝色，非耐热大肠菌群菌落为灰色至奶油色。

1.2 证实实验 对可疑菌落转种EC培养基，44.5℃培养24 h±2 h，如产气则证实为耐热大肠菌群。

2.结果报告

计数被证实的耐热大肠菌落数，水中耐热大肠菌群数系以100 mL水样中酎热大肠菌群菌落形成单位(CFU)表示，见式(1)。

耐热大肠菌菌落数(CFU/100 mL.)=（所计得的耐热大肠菌菌落数×100）/过滤的水样体积(mL) …………………………………………………………( 1 )

2、大肠埃希氏菌

1.大肠埃希氏菌（多管发酵法）

一、大肠埃希氏菌多管发酵法的含义

二、培养基与试剂

三、仪器

四、检验步骤

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