蛋白酪氨酸磷酸酶1B（Proteintyrosinephosphatase1B，PTP1B）属于蛋白质酪氨酸磷酸酶家族，以跨膜受体样蛋白和胞内酶2种形式存在。PTP1B可以催化蛋白质磷酸化酪氨酸残基脱去磷酸基团，最初从人的胎盘细胞中分离纯化制得。近年来，研究发现PTP1B与胰岛素抵抗、卵巢癌、胃癌、老年痴呆、白血病、肥胖等疾病密切相关。因此，PTP1B是糖尿病、肥胖、肿瘤等疾病治疗药物研发的有效靶点之一，在相关疾病的药物研究开发中有重要价值。PTP1B广泛存在于人体、动物、植物及微生物中。

目前，研究较多的是对酶催化活性区或全酶的原核表达，哺乳动物来源酶研究较少。但是微生物来源酶和人体内PTP1B酶在最适温度、最适pH等酶学特性上有差异，给PTP1B相关临床药物的制备带来极大的不便。试验主要采用丙酮沉淀、硫酸铵分级盐溶盐析和透析相结合的方法对猪血中蛋白酪氨酸磷酸酶的粗提液进行初步纯化，以期得到成本低廉、活性足够、和人类血缘关系较近的哺乳动物PTP1B酶，并在此基础上进一步研究猪血蛋白酪氨酸磷酸酶的性质，以期满足PTP1B靶点相关药物筛选试验用酶的需求。

1材料与方法

1.1材料与试剂

新鲜猪血（郑州市郑荣屠宰场）；红细胞裂解液，按照参考文献进行配制；分析缓冲液（pH7.20Tris-HC120mmol/L）；0.1%β-巯基乙醇；1mg/mL牛血清白蛋白；对硝基苯磷酸二钠（pNPP，美国Amresco公司）；其余试剂均为国产分析纯。

1.2仪器与设备

酶标仪（MultiscanMK3，芬兰）；723可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）；电热恒温水浴锅（HH-S11-2，北京长安科学仪器）；高速冷冻台式离心机（TGL-18C，上海安亨科学仪器厂）。

1.3方法

1.3.1蛋白酪氨酸磷酸酶粗酶液的制备

1.3.1.1分离红细胞

取新鲜猪血，按7︰1加入3.8%柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀，以3000r/min离心15min，除去上层黄色血浆，收集红细胞，于-40℃保存。

1.3.1.2洗涤

红细胞用2倍体积0.85%氯化钠溶液洗涤离心，直至上清液无色。

1.3.1.3红细胞溶血

向洗净的红血球中加入2倍体积的红细胞裂解液，机械搅拌30min，于0~4℃静置过夜。

1.3.1.4除血红蛋白

裂解液在10000r/min，4℃下离心10min，小心取上清液，向上清液中分别缓慢加入0.25倍体积的预冷乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿，振荡15min左右，静置30min，离心除去沉淀，收集上清液。

1.3.1.5沉淀

向上清液中加入等量冷却丙酮，有白色沉淀产生，静置30min，离心法收集沉淀物，沉淀用分析缓冲液溶解，即得粗酶液，于-20℃保存备用。

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