猪流行性腹泻(Porcineepidemicdiarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)引起的急性、接触性、高度传染性消化道疾病，主要症状为呕吐、水样腹泻和脱水。PED波及的范围广，在全球均有病例报道，成为几十年来影响亚洲地区养猪业的大问题。PED通常多发于寒湿较重的秋冬季，近年多呈地方性流行。不同年龄段的猪只对该病毒均易感，幼年猪感染率高达100%，7日龄以下仔猪的病死率为80%~100%。PED已给我国养猪业造成了巨大的经济损失。

由于PED与猪传染性胃肠炎(TGE)的临床症状较为相似，临诊中较难进行鉴别诊断，给疾病的确诊、治疗和防控带来了很大困难，故PED的病原检测成为目前最有效的鉴别诊断方法。传统的病原诊断方法包括病毒分离与鉴定、RT-PCR、荧光RT-PCR等，具有一定的特异性和灵敏性，但其无法满足快速准确检测的要求，即无法获得分子诊断的黄金标准一基因序列，从而可能出现假阳性结果。而利用常规的Sanger测序法仅在对大片段DNA进行序列测定时才显示出优势，且速度慢、成本高、通量低，但如果在实际工作中，引物选择得好，那么很短的一一段保守特异性序列就可满足对病原体分子诊断的需要。

焦磷酸测序技术(Pyrosequencing)是一种能够进行定量序列测定的短链测序技术。该技术可以快速、准确、实时地进行短DNA序列分析，检测通量高:可同时进行多达96份样品的测序，无需进行电泳:对DNA片断无需荧光标记，操作简单方便，可程序化;便于构建标准化操作流程和规范，能够保证实验结果的稳定性和准确性。目前该技术在物种鉴定、病毒快速鉴定和分型、微生物检测等方面被广泛应用。

本研究针对PEDVN蛋白基因序列，利用焦磷酸测序软件设计RT-PCR扩增引物及焦磷酸测序引物，建立了N蛋白基因的焦磷酸测序检测方法，直接通过测序结果就能够快速从基因序列水平上直观地进行PEDV鉴别诊断，既能快速鉴定PEDV，又能区分鉴别PEDV和TGEV，大大提高了检测效率，实现了从基因水平上对PEDV进行精确鉴定。

1材料与方法

1.1材料

猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等核酸样本由本实验室保存。

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