灵芝发酵粉中三萜化合物提取、纯化及结构初步分析（二）

（2）浸泡时间对灵芝发酵粉三萜得率的影响

由图2可知，不同浸泡时间对灵芝发酵粉三萜化合物的提取得率有极显著影响（p＜0.01）。浸泡80min时三萜得率达到最高值0.6423mg/g，当浸泡时间在80min以下时，灵芝发酵粉三萜得率逐渐上升；当浸泡时间超过80min时，三萜得率在逐渐降低，因此，选择最佳的浸泡时间为80min。

（3）料液比对灵芝发酵粉三萜得率的影响

由图3可知，不同的料液比对灵芝发酵粉三萜化合物得率是有极显著影响（p＜0.01）。当料液比为1∶30时，三萜得率最高；料液比过低过高都会使三萜得率降低。分析其原因可能为一定量的灵芝发酵粉，加乙醇量过少时，不利于灵芝发酵粉中三萜化合物的溶出，使得95%乙醇中三萜化合物较少，当料液比增大时，灵芝发酵粉中的三萜化合物全部溶出，三萜得率较高，因此选择的最佳料液比为1∶30。

（4）回流温度对灵芝发酵粉三萜得率的影响

由图4可知，回流温度对灵芝发酵粉三萜得率有极显著性影响（p＜0.01）。当回流温度为85℃时，三萜得率最高，为0.6168mg/g；当回流温度高于85℃时，三萜得率反而逐渐会降低。究其原因为在一定温度范围内，温度越高越有利于灵芝发酵粉中三萜化合物的溶出；当温度过高时，三萜化合物的稳定性受到影响，使其得率降低。故选择回流温度为85℃。

（5）回流时间对灵芝发酵粉三萜得率的影响

由图5可以看出，回流时间对三萜得率的影响极显著（p＜0.01）。回流3h时，三萜得率最高；回流超过3h，三萜得率反而会降低。因此，选择最佳回流提取时间为3h。

（6）回流次数对灵芝发酵粉三萜得率的影响

由图6可以看出，灵芝发酵粉三萜得率随着回流次数的增加呈现上升趋势，在回流次数为5次时三萜得率达到0.6849mg/g，但在提取3次以后，三萜得率提高不明显，故从经济和时间成本考虑，选择提取3次为最佳的提取次数。经方差分析，该范围内，回流次数对三萜得率的影响极显著（p＜0.01），故选择回流次数为3次。

（7）响应面试验结果

试验选取料液比、回流时间、回流温度作为考察因素，根据Box-Behnken试验设计原理，以灵芝发酵粉三萜得率作为响应值，采用3因素3水平进行响应面试验，结果见表2。

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