千年草提取物对人成纤维细胞胶原蛋白合成的影响及其抗衰老作用（二）

2.2千年草提取物细胞内ROS清除活性

随着千年草提取物浓度的升高人皮肤成纤维细胞ROS活性逐渐被抑制，其中，50μg/ml，100μg/ml浓度的千年草籽乙醇提取物的ROS清除活性最强，见表4。

2.3千年草提取物的细胞增殖作用

随着千年草提取物浓度的升高人皮肤成纤维细胞的增殖率逐渐升高，与1μg/ml千年草热水提取物和乙醇提取物相比，10μg/ml以上浓度的对应部分的千年草提取物能够使人皮肤成纤维细胞的增殖率显著上升(P<0.05)，且100μg/ml千年草籽的乙醇提取物和热水提取物的促进作用最强，见表4。

2.4千年草提取物对胶原蛋白合成的影响

随着千年草提取物浓度的升高人皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成率逐渐增强(P<0.05)，其中，浓度为50μg/ml的千年草籽热水提取物胶原蛋白合成率最高，见表5。

3讨论

仙人掌含有多种多糖、生物碱、黄酮类、化黄酮合物、皂苷、蔽类等活性成分，本研究分别采用热水浸提和乙醇浸提，提取物主要成分可能为粗多糖、多酚类、黄酮类物质，这类物质均具有良好的抗氧化活性。国内常见的米邦塔、仙巴掌、梨果仙人掌、量天和仙人掌都具有良好的清除自由基能力，文献报道这4种仙人掌的羟自由基清除活性低于芦丁。本研究发现千年草提取物均具有清除DPPH、ABTS自由基活性，但其活性弱于同浓度的VC，各种提取物中，千年草籽乙醇提物的清除DPPH、ABTS自由基能力最强，IC50浓度最低。ROS是一种强氧化剂，是细胞内代谢后的有害产物，活性氧包括氧自由基、丙二醛等，可以对脂质造成过氧化，损害细胞的脂质双分子层，加速细胞衰老，损害细胞功能，过量的ROS会损害胶原蛋白，引起皮肤松弛、产生皱纹，过量的ROS还会引起机体内氧化应激反应过度，引起多种疾病。本研究结果表明千年草热水提取物和乙醇提取物对人皮肤成纤维细胞ROS活性均具有抑制作用，其中千年草籽乙醇提取物的ROS抑制作用最强，说明千年草仙人掌具有一定的抗氧化、清除自由基能力，这与Cho等报道有相似之处。但对于其发挥抗氧化清除自由基的具体有效成分还需进一步研究。

皮肤衰老和皮肤受损后的修复是一个复杂的生物学过程，成纤维细胞能够合成I型胶原蛋白活性，是重要的修复细胞之一。皮肤修复的生物过程通常是由成纤维细胞的增殖分化来完成的，人皮肤成纤维细胞是研究胶原蛋白、皮肤衰老的常用细胞模型。研究认为人皮肤成纤维细胞的胶原蛋白分泌量在1w左右达到峰值。本研究发现千年草提取物在10μg/ml以上时对人皮肤成纤维细胞增殖均有一定的促进作用，且随着浓度增加，其促进作用增强，同一浓度的不同提取方法及不同部位千年草提取物对人皮肤成纤维细胞的增殖作用无显著差异，说明千年草提取物无明显细胞毒性，且对Ⅰ型胶原蛋白的合成具有促进作用，随着浓度增加，促进作用增强，浓度为50μg/ml的千年草籽热水提取物胶原蛋白增加率最高。牟丽秋等采用杜仲提取液与MC3T3-EI成骨细胞在体外进行共培养，发现杜仲提取液具有促进细胞增殖、分化的作用，认为京尼平苷和绿原酸是促进其增殖的主要有效成分，京尼平苷和桃叶珊瑚苷是促进大鼠胶原蛋白合成的有效成分。ROS会促进胶原蛋白凋亡，引起细胞损伤，千年草提取物具有清除ROS活性，这可能是其对人皮肤成纤维细胞的增殖作用及对Ⅰ型胶原蛋白活性的促进作用、抗衰老的原因之一。

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