蛋白酶酶解红花籽粕的工艺条件研究（二）

（7）单因素试验

以红花籽粕的水解度和还原力为试验指标，以超声时间、超声温度、pH、酶用量为试验因素，做单因素试验，分析各因素对红花籽粕的水解度和还原力的影响。

（8）正交试验

在单因素试验的基础上，对影响蛋白酶的水解度和还原力的主要因素超声时间、超声温度、pH、酶用量等进行L₉（3⁴）正交试验，以确定蛋白酶酶解的最佳的工艺条件。正交实验因素水平见表1。

二、实验结果与分析

1、L-酪氨酸标准曲线

在波长275nm下，测得吸光度A，结果如表2。

以L-酪氨酸浓度为横坐标，吸光值为纵坐标得L-酪氨酸标准曲线图1。

由图1得出L-酪氨酸标准曲线方程为：Y=0.0175X-0.0024，R²=0.9998，R²＞0.997表明L-酪氨酸在0-60μg/mL浓度范围内线性关系良好。

2、超声波处理前后蛋白酶的变化

分析三种蛋白酶未经超声处理和超声处理的酶活力的变化，根据（1）公式计算出酶活力。

实验结果表明，木瓜蛋白酶的活性提高了2.96倍，枯草芽孢杆菌中性蛋白酶提高了1.91倍，胰蛋白酶的活性提高了1.17倍，木瓜蛋白酶的活性提高最快，试验结果证明在55℃条件下用超声波处理10min促进了酶的分解，提高了蛋白酶的活力，由数据看出木瓜蛋白酶提升最快，所以选取木瓜蛋白酶进行工艺研究。

3、单因素实验

（1）超声时间对红花籽粕水解度的影响

在酶用量为2.9%、pH7.0、超声温度为55℃的条件下，分别测超声时间为5min、10min、15min、20min、25min的情况下水解1h，其水解度和还原力结果如图2、图3所示。

由图2，图3可知，超声时间的改变水解度和还原力都受到了影响，水解度在超声时间为10min的时候最大，之后的随着时间增长，还原力下降明显，可能是酶失活，水解度下降；还原力在超声时间为15min的时候最大，其还原力最强。综合考虑，认为超声时间10min最为合适。

（2）超声温度的对红花籽粕水解度的影响

在酶用量为2.9%、pH7.0、超声时间为10min的条件下，分别测超声温度为35℃、45℃、55℃、65℃、75℃的情况下水解1h，其水解度和还原力结果如图4、图5所示。

由图4可知，先是随着超声温度的增加，红花籽粕的水解度增大，在超声温度是65℃时，水解度最大，然后开始出现下降趋势，说明在65℃左右时可能是由于热变性引起的水解度最大；由图5可知，先是随着超声温度的增加，红花籽粕的还原力增大，在超声温度是55℃时，还原力最大，然后开始出现下降趋势，但是下降不明显。综合考虑水解度、还原力等因素，认为最合适超声温度为65℃。

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